| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一部分 实验研究 | 第11页 |
| 第一章 胎牛耳成纤维细胞、肌肉和脂肪间充质细胞的分离和培养 | 第11-26页 |
| 摘要 | 第11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 1 试剂和设备 | 第12页 |
| ·试剂和材料 | 第12页 |
| ·仪器和设备 | 第12页 |
| 2 方法 | 第12-16页 |
| ·胎牛成纤维细胞的分离 | 第12-13页 |
| ·胎牛肌肉间充质细胞的分离 | 第13-14页 |
| ·胎牛脂肪间充质细胞的分离 | 第14页 |
| ·成肌分化和成脂分化 | 第14-15页 |
| ·免疫荧光染色 | 第15页 |
| ·反转录PCR检测 | 第15-16页 |
| 3 结果 | 第16-19页 |
| ·牛胎儿耳尖成纤维细胞分离结果 | 第16页 |
| ·牛胎儿肌肉和脂肪间充质细胞分离结果 | 第16-17页 |
| ·成肌分化和成脂分化结果 | 第17-18页 |
| ·vimentin染色结果 | 第18-19页 |
| ·反转录PCR检测结果 | 第19页 |
| 4 讨论 | 第19-22页 |
| 5 结论 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-26页 |
| 第二章 ZFNs介导的牛MSTN基因敲除 | 第26-40页 |
| 摘要 | 第26页 |
| 前言 | 第26-27页 |
| 1 试剂和设备 | 第27-28页 |
| ·实验试剂和材料 | 第27-28页 |
| ·仪器和设备 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-31页 |
| ·脂质体转染 | 第28页 |
| ·细胞单克隆的制备 | 第28-29页 |
| ·基因组的提取 | 第29-30页 |
| ·突变体的筛选 | 第30页 |
| ·细胞染色体计数 | 第30页 |
| ·体细胞核移植(SCNT) | 第30-31页 |
| ·滋养层干细胞的制备 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-34页 |
| ·突变体检测结果 | 第31页 |
| ·染色体计数结果 | 第31-32页 |
| ·SCNT结果 | 第32页 |
| ·类滋养层干细胞制备结果 | 第32-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 5 结论 | 第36-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 第三章 ZFNs介导的外源基因定点整合 | 第40-61页 |
| 摘要 | 第40页 |
| 前言 | 第40-42页 |
| 1 试剂和设备 | 第42页 |
| ·实验试剂和材料 | 第42页 |
| ·仪器设备 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-51页 |
| ·pFlrkt-1载体的构建 | 第42-43页 |
| ·pGlrkt-1载体的构建 | 第43-44页 |
| ·脂质体转染 | 第44-45页 |
| ·电转染条件的优化 | 第45-46页 |
| ·打靶细胞的制备和筛选 | 第46-47页 |
| ·基因组的提取 | 第47页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第47-51页 |
| 3 结果 | 第51-55页 |
| ·同源臂扩增结果 | 第51页 |
| ·质粒构建结果 | 第51页 |
| ·EGFP基因的扩增和pGlrkt-1载体的构建结果 | 第51-53页 |
| ·电转染条件优化结果 | 第53页 |
| ·转基因细胞鉴定结果 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| ·转染效率的探讨 | 第55-56页 |
| ·fat-1基因定点整合 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 第四章 结论和后续研究 | 第61页 |
| 1 结论 | 第61页 |
| 2 后续研究 | 第61页 |
| 第二部分 文献综述 | 第61-62页 |
| 大型家畜基因敲减和基因敲除的研究进展 | 第62-79页 |
| 摘要 | 第62页 |
| 前言 | 第62-63页 |
| 1 RNAi技术在大型家畜中的应用 | 第63-67页 |
| ·RNAi技术在猪抗病和性状改良上的应用 | 第63-64页 |
| ·RNAi在反刍动物上的应用 | 第64-67页 |
| 2 锌指核酶技术在大型家畜中的应用 | 第67-69页 |
| 3 TALENs在大型家畜中的应用 | 第69-71页 |
| 4 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 在读期间论文发表情况 | 第80页 |