| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第1章 综述 | 第9-21页 |
| ·研究背景 | 第9-18页 |
| ·革兰氏阴性菌中的蛋白分泌系统 | 第9-11页 |
| ·Ⅵ型分泌系统功能简述 | 第11-14页 |
| ·T6SS的结构组分及功能 | 第14-15页 |
| ·T6SS核心组分-Vgr6 | 第15-18页 |
| ·VgrG3与其免疫蛋白TsaB | 第18页 |
| ·研究内容及意义 | 第18-21页 |
| 第2章 VgrG3C-TsaB复合物及TsaB的表达、纯化和结晶 | 第21-37页 |
| ·实验材料和方法 | 第21-24页 |
| ·实验菌株、基因组和载体 | 第21页 |
| ·实验试剂和工具酶 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·试剂配制 | 第22-24页 |
| ·实验流程及方法 | 第24-30页 |
| ·目的基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·蛋白质表达和纯化 | 第27-28页 |
| ·Se-Met标记的蛋白的表达和纯化 | 第28页 |
| ·蛋白结晶条件筛选 | 第28-30页 |
| ·实验结果 | 第30-33页 |
| ·TsaB蛋白表达纯化 | 第30-31页 |
| ·VgrG3C蛋白表达纯化 | 第31-32页 |
| ·VgrG3C-TsaB复合物蛋白纯化 | 第32页 |
| ·Se-Met标记的VgrG3C-TsaB复合物蛋白组装和纯化 | 第32-33页 |
| ·结晶条件筛选及晶体优化 | 第33-37页 |
| ·蛋白的结晶条件筛选 | 第33页 |
| ·TsaB(Native)本体蛋白的晶体生长以及晶体优化 | 第33-34页 |
| ·SeTsaB(硒代)蛋白的晶体生长 | 第34页 |
| ·VgrG3C-TsaB(Native)本体复合物的晶体生长 | 第34-36页 |
| ·Se-Met标记的VgrG3C-TsaB复合物的晶体生长及晶体优化 | 第36-37页 |
| 第3章 TsaB及VgrG3C-TsaB蛋白晶体结构的解析 | 第37-47页 |
| ·衍射数据收集与处理 | 第37-39页 |
| ·X射线对晶体衍射的原理 | 第37页 |
| ·衍射数据的收集 | 第37-38页 |
| ·衍射数据的处理 | 第38页 |
| ·蛋白晶体衍射数据收集与处理的结果 | 第38-39页 |
| ·结构解析的相位问题 | 第39-40页 |
| ·蛋白结构的解析 | 第40-47页 |
| ·电子密度图的解析、模型构建和结构精修及质量评估 | 第40-41页 |
| ·VgrG3C-TsaB硒代蛋白晶体最终结构模型的质量评价 | 第41-44页 |
| ·TsaB蛋白晶体最终结构模型的质量评价 | 第44-47页 |
| 第4章 TsaB和VgrG3C-TsaB复合物晶体结构分析及相关功能研究 | 第47-69页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·表达菌株和表达载体 | 第47页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第47-48页 |
| ·实验方法和流程 | 第48-52页 |
| ·定点突变 | 第48-50页 |
| ·大肠杆菌细胞活性检测 | 第50页 |
| ·小角散射 | 第50页 |
| ·凝胶过滤分析 | 第50-51页 |
| ·分析性超速离心 | 第51页 |
| ·表面等离子共振 | 第51-52页 |
| ·实验结果 | 第52-67页 |
| ·VgrG3C-TsaB复合物的异源四聚体结构 | 第52-53页 |
| ·VgrG3C的结构概述 | 第53-55页 |
| ·VgrG3C的同源结构比对分析 | 第55-58页 |
| ·VgrG3C的活性位点分析 | 第58-60页 |
| ·TsaB倾向处于寡聚状态 | 第60页 |
| ·TsaB的结构概述 | 第60-61页 |
| ·VgrG3C和TsaB间的相互作用 | 第61-64页 |
| ·TsaB对VgrG3C的抑制机制 | 第64-65页 |
| ·TsaB的寡聚化状态可能有助于抑制VgrG3C | 第65-67页 |
| ·讨论分析 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第74页 |
