| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-33页 |
| ·纳米载体的定义和特性 | 第12-14页 |
| ·纳米载体的的分类 | 第14-17页 |
| ·纳米载体的临床应用和市场效益 | 第17-19页 |
| ·小干扰RNA药物的作用机理和应用瓶颈 | 第19-23页 |
| ·纳米载体用于小干扰RNA药物的系统输送需克服的给药屏障 | 第23-28页 |
| ·血液循环 | 第24-25页 |
| ·在病灶部位的富集 | 第25-26页 |
| ·被靶细胞摄取 | 第26-27页 |
| ·胞内释放 | 第27-28页 |
| ·本课题的选题目的及主要研究内容 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-33页 |
| 第二章 N-乙酰半乳糖胺修饰的混合纳米胶束颗粒用作肝靶向小干扰RNA输送体系 | 第33-59页 |
| ·引言 | 第33-34页 |
| ·实验材料 | 第34-37页 |
| ·主要材料 | 第34-35页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·细胞株 | 第35-36页 |
| ·主要药品及试剂 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-45页 |
| ·混合胶束纳米颗粒(MNP)的制备 | 第37-38页 |
| ·混合胶束纳米颗粒结合siRNA的能力 | 第38页 |
| ·混合胶束纳米颗粒的表征 | 第38-39页 |
| ·混合胶束纳米颗粒的血清稳定性检测 | 第39页 |
| ·Gal-MNP/FAM-siRNA的细胞内吞和细胞水平肝实质靶向能力的检测 | 第39-40页 |
| ·定量PCR检测细胞水平肝实质细胞内源性基因apoB下调 | 第40-41页 |
| ·Gal-MNP及Gal-MNP/siN.C.对小鼠原代肝实质细胞的细胞活力影响 | 第41-42页 |
| ·小动物成像观察Gal-MNP/Cy5-siRNA小鼠脏器分布和肝脏靶向 | 第42页 |
| ·定量检测Gal-MNP/Cy5-siRNA小鼠脏器分布和肝脏靶向 | 第42-43页 |
| ·激光共聚焦显微镜检测Gal-MNP/Cy5-siRNA在小鼠肝脏的分布 | 第43页 |
| ·流式细胞术半定量检测Gal-MNP/Cy5-siRNA在小鼠肝脏肝实质细胞和枯否细胞的摄取情况 | 第43-44页 |
| ·定量PCR检测小鼠体内肝脏内源性基因apoB mRNA水平的沉默 | 第44页 |
| ·酶联免疫吸附实验检测小鼠体内血清中apoB蛋白水平的沉默 | 第44页 |
| ·小鼠体内血清中胆固醇和甘油三酯水平的变化 | 第44页 |
| ·酶联免疫吸附实验检测小鼠血清中的免疫因子表达水平 | 第44页 |
| ·小鼠肝功能指标检测 | 第44-45页 |
| ·小鼠肝脏H&E切片观察和体重观察 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-56页 |
| ·混合胶束纳米颗粒的制备和表征 | 第45-46页 |
| ·混合胶束纳米颗粒的优化 | 第46-47页 |
| ·Gal-MNP的制备及siRNA的结合 | 第47-48页 |
| ·细胞水平Gal-MNP/FAM-siRNA高效靶向小鼠原代肝实质细胞 | 第48-50页 |
| ·细胞水平Gal-MNP/siapoB沉默肝实质细胞内源性基因apoB的表达 | 第50-51页 |
| ·Gal-MNP及Gal-MNP/siN.C.对小鼠原代肝实质细胞的细胞相容性良好 | 第51页 |
| ·Gal-MNP/Cy5-siRNA小鼠脏器分布和靶向肝脏 | 第51-53页 |
| ·Gal-MNP/Cy5-siRNA更易被小鼠肝实质细胞内化 | 第53页 |
| ·Gal-MNP/siapoB沉默小鼠肝实质细胞内源性基因apoB的表达 | 第53-54页 |
| ·体内沉默apoB的表达引起血脂含量下降 | 第54页 |
| ·Gal-MNP/siRNA不引起小鼠天然免疫反应和肝脏毒性 | 第54-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 第三章 基质金属蛋白酶-2敏感的“脱壳”纳米胶束输送siRNA克服系统给药多重屏障 | 第59-99页 |
| ·引言 | 第59-61页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·主要材料 | 第61-62页 |
| ·细胞株 | 第62页 |
| ·主要药品及试剂 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-73页 |
| ·胶束纳米颗粒(MSNP)的制备和表征 | 第63-64页 |
| ·MSNP_(siRNA)的制备和表征 | 第64页 |
| ·多肽和MSNP对基质金属蛋白酶-2的敏感性 | 第64-65页 |
| ·MSNP_(siRNA)的血清稳定性 | 第65页 |
| ·MTT实验检测MSNP_(siRNA)对MDA-MB-231细胞的生物相容性 | 第65-66页 |
| ·MSNP_(siRNA)的细胞内吞和内涵体逃逸 | 第66-67页 |
| ·定量PCR检测MSNP输送siPlk1对Plk1 mRNA表达的影响 | 第67-68页 |
| ·Western Blot检测MSNP_(siPlk1)对Plk1蛋白表达的影响 | 第68页 |
| ·克隆形成实验检测MSNP_(siPlK1)对细胞增殖的影响 | 第68-69页 |
| ·Annexin V/PI双染法检测MSNP_(siPlk1)对细胞凋亡的影响 | 第69页 |
| ·荷瘤小鼠模型的建立 | 第69页 |
| ·MSNP_(FAM-siRNA)的在小鼠体内的药代动力学检测 | 第69-70页 |
| ·MSNP_(Cy5-siRNA)在荷瘤小鼠体内分布和成像 | 第70-71页 |
| ·MSNP_(Cy5-siRNA)被肿瘤组织细胞摄取情况 | 第71-72页 |
| ·MSNP_(siPlk1)对乳腺癌的肿瘤抑制实验 | 第72-73页 |
| ·肿瘤组织中的Plk1表达水平检测 | 第73页 |
| ·结果与讨论 | 第73-94页 |
| ·MSNP的制备和表征 | 第73-74页 |
| ·MSNP结合siRNA的能力 | 第74-76页 |
| ·多肽和MSNP对基质金属蛋白酶-2的敏感性 | 第76页 |
| ·MSNP_(siRNA)在含血清环境中具备良好的稳定性 | 第76-78页 |
| ·MSNP_(siRNA)对MDA-MB-231细胞具备较好的生物安全性 | 第78-79页 |
| ·MSNP显著增加FAM-siRNA进入基质金属蛋白酶-2高表达的细胞 | 第79-81页 |
| ·MSNP显著增加FAM-siRNA基质金属蛋白酶-2阳性细胞中内涵体逃逸能力 | 第81-83页 |
| ·MSNP_(siPlk1)高效沉默基质金属蛋白酶-2阳性细胞Plk1基因表达 | 第83-85页 |
| ·MSNP_(siPlk1)显著抑制基质金属蛋白酶-2高表达的细胞克隆形成能力 | 第85页 |
| ·MSNP_(siPlk1)显著增加基质金属蛋白酶-2高表达的细胞凋亡比例 | 第85页 |
| ·MSNP_(FAM-siRNA)具备血液长循环能力 | 第85-86页 |
| ·MSNP_(FAM-siRNA)增加FAM-siRNA在肿瘤的富集 | 第86-89页 |
| ·MSNP_(siRNA)增加siRNA进入肿瘤组织细胞的量 | 第89-92页 |
| ·MSNP_(siPlK1)改善乳腺癌的治疗效果 | 第92-94页 |
| ·本章小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-99页 |
| 附录一 主要仪器设备 | 第99-101页 |
| 附录二 常规试剂 | 第101-103页 |
| 附录三 主要溶液配制 | 第103-107页 |
| 附录四 常规实验方法 | 第107-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第115-116页 |
