| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-21页 |
| ·普鲁兰酶 | 第10-16页 |
| ·普鲁兰酶的相关介绍 | 第10-11页 |
| ·普鲁兰酶的相关研究 | 第11-14页 |
| ·产普鲁兰酶的菌株 | 第11-12页 |
| ·普鲁兰酶的类型 | 第12-13页 |
| ·分子水平上的研究 | 第13-14页 |
| ·普鲁兰酶的使用 | 第14-16页 |
| ·普鲁兰酶用于高麦芽糖浆的生产 | 第14-15页 |
| ·普鲁兰酶用于高葡萄糖浆的生产 | 第15页 |
| ·普鲁兰酶用于干啤酒的生产 | 第15-16页 |
| ·普鲁兰酶的其它应用 | 第16页 |
| ·枯草芽孢杆菌 | 第16-19页 |
| ·Bacillus subtilis的相关介绍 | 第16-17页 |
| ·Bacillus subtilis作为表达宿主的缺点 | 第17页 |
| ·Bacillus subtilis基因表达 | 第17-19页 |
| ·转录 | 第17-18页 |
| ·RBS | 第18页 |
| ·分泌表达蛋白 | 第18-19页 |
| ·Bacillus subtilis表达体系的研究 | 第19页 |
| ·研究的意义及主要内容 | 第19-21页 |
| 第2章 普鲁兰酶基因克隆及在E.coli中的表达 | 第21-44页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·材料试剂和方法 | 第21-44页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·酶和试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基和溶液 | 第22-23页 |
| ·实验仪器与设备 | 第23页 |
| ·PCR引物 | 第23页 |
| ·菌种的筛选 | 第23-24页 |
| ·基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·染色体DNA的提取 | 第24页 |
| ·引物设计及PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·DNA的纯化 | 第25-26页 |
| ·DNA的酶切 | 第26页 |
| ·DNA连接反应 | 第26-27页 |
| ·感受态的制备及转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第27页 |
| ·基因的表达及酶活分析 | 第27-30页 |
| ·重组菌株最适IPTG诱导浓度 | 第27-28页 |
| ·重组菌蛋白SDS-PAGE分析 | 第28页 |
| ·酶活力的测定 | 第28-29页 |
| ·部分酶学性质检测 | 第29-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-42页 |
| ·菌种的筛选 | 第30页 |
| ·细菌总DNA提取 | 第30-31页 |
| ·普鲁兰酶基因的克隆 | 第31-35页 |
| ·大肠杆菌表达体系的构建 | 第35-37页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第37-39页 |
| ·酶活力的测定 | 第39-40页 |
| ·部分酶学性质检测 | 第40-42页 |
| ·本章小结 | 第42-44页 |
| 第3章 枯草芽孢杆菌胞内及分泌表达载体的构建 | 第44-59页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·材料试剂和方法 | 第44-49页 |
| ·质粒和菌株及其生长条件 | 第44-45页 |
| ·PCR引物 | 第45-46页 |
| ·穿梭表达载体pBNS1和pBNS2的构建 | 第46-48页 |
| ·Bacillus subtilis感受态的制备及电转化 | 第48页 |
| ·GFP报道载体的构建以及表达 | 第48页 |
| ·生长曲线的测定及SDS-PAGE电泳分析 | 第48-49页 |
| ·绿色荧光蛋白的检测 | 第49页 |
| ·结果和讨论 | 第49-58页 |
| ·胞内表达载体pBNS1和分泌表达载体pBNS2 | 第49-50页 |
| ·表达载体的gfp基因验证 | 第50-52页 |
| ·重组菌株的分析 | 第52-56页 |
| ·绿色荧光蛋白的检测 | 第56-57页 |
| ·其它结果 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第4章 结论与展望 | 第59-61页 |
| ·全文总结 | 第59-60页 |
| ·展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-73页 |
