| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-38页 |
| 1 植物病毒与昆虫的互作 | 第20-23页 |
| 2 昆虫与水稻病毒的传播 | 第23-25页 |
| 3 南方水稻黑条矮缩病毒 | 第25-30页 |
| ·南方水稻黑条矮缩病毒的发现 | 第25-26页 |
| ·南方水稻黑条矮缩病毒的分类地位与鉴定 | 第26-27页 |
| ·南方水稻黑条矮缩病毒的基因组结构 | 第27-28页 |
| ·南方水稻黑条矮缩病毒的寄主及传播介体 | 第28-30页 |
| 4 昆虫与植物病毒基因蛋白互作研究常用技术 | 第30-37页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第30-34页 |
| ·酵母双杂交系统原理及操作流程 | 第30-32页 |
| ·YTHS优缺点 | 第32页 |
| ·YTHS在病毒学领域的应用 | 第32-34页 |
| ·双分子荧光互补 | 第34-35页 |
| ·免疫共沉淀 | 第35-36页 |
| ·GST pull-down技术 | 第36-37页 |
| 5 选题依据与目的 | 第37-38页 |
| 第二章 试验材料与方法 | 第38-55页 |
| 1 试验材料 | 第38-39页 |
| ·生物材料 | 第38页 |
| ·仪器与试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第39页 |
| 2 试验方法 | 第39-55页 |
| ·ELISA | 第39-40页 |
| ·总RNA提取 | 第40页 |
| ·mRNA分离 | 第40-41页 |
| ·dsRNA提取 | 第41-42页 |
| ·目的基因片段克隆 | 第42-43页 |
| ·cDNA合成 | 第42页 |
| ·PCR克隆目的基因片段 | 第42-43页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第43页 |
| ·克隆载体的构建 | 第43-45页 |
| ·T-A连接 | 第43-44页 |
| ·连接产物或质粒转化 | 第44页 |
| ·重组质粒抽提 | 第44-45页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第45页 |
| ·序列测定和分析 | 第45页 |
| ·重组酵母表达载体构建 | 第45-46页 |
| ·酵母表达载体和目的片段的酶切与纯化 | 第45页 |
| ·连接目的基因片段与表达载体 | 第45-46页 |
| ·酵母转化 | 第46-47页 |
| ·共转化法 | 第46页 |
| ·重组表达载体质粒大批量转入酵母菌株 | 第46-47页 |
| ·重组表达载体质粒在酵母菌株中的毒性及自激活检测 | 第47页 |
| ·酵母表达载体重组蛋白在酵母菌株中表达检测 | 第47-49页 |
| ·尿素/SDS法抽提酵母表达载体重组子蛋白总蛋白 | 第47-48页 |
| ·Western-blot检测酵母表达载体重组子蛋白表达 | 第48-49页 |
| ·利用酵母双杂交系统进行基因互作研究 | 第49页 |
| ·Mating法筛选互作蛋白 | 第49-51页 |
| ·Mating法筛选互作蛋白操作流程 | 第49-50页 |
| ·酵母质粒提取 | 第50-51页 |
| ·阳性克隆的鉴定和分析 | 第51页 |
| ·BiFC验证互作 | 第51-53页 |
| ·BiFC载体构建 | 第51页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第51-52页 |
| ·电击转化农杆菌 | 第52页 |
| ·农杆菌浸润烟草 | 第52-53页 |
| ·免疫电镜 | 第53-55页 |
| ·样品包埋 | 第53页 |
| ·胶体金标记 | 第53-54页 |
| ·样品染色及观察 | 第54-55页 |
| 第三章 SRBSDV基因克隆及酵母表达载体构建 | 第55-64页 |
| 1 材料与方法 | 第55-58页 |
| ·材料 | 第55-57页 |
| ·生物材料 | 第55页 |
| ·引物 | 第55-57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-58页 |
| ·病毒dsRNA提取 | 第57页 |
| ·连接RT-PCR | 第57页 |
| ·克隆 | 第57页 |
| ·测序和序列分析 | 第57页 |
| ·YTH重组载体构建 | 第57页 |
| ·诱饵蛋白毒性和自激活检测 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-63页 |
| ·SRBSDV基因组dsRNA | 第58页 |
| ·引物设计和SRBSDV全序列扩增 | 第58-59页 |
| ·SRBSDV越南分离物YTH重组载体构建 | 第59-61页 |
| ·SRBSDV越南分离物S1-S4克隆 | 第59页 |
| ·重组酵母表达载体的构建 | 第59-61页 |
| ·YTH阳性重组克隆的测序鉴定 | 第61-62页 |
| ·SRBSDV越南分离物YTH重组载体毒性和自激活检测结果 | 第62-63页 |
| 3 小结与讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 白背飞虱cDNA文库的构建 | 第64-77页 |
| 1. 材料和方法 | 第64-72页 |
| ·试验材料 | 第64-66页 |
| ·载体与菌株 | 第64-65页 |
| ·attB1构库接头 | 第65-66页 |
| ·文库构建方法 | 第66-72页 |
| ·Trizol法提取白背飞虱总RNA | 第66页 |
| ·分离mRNA | 第66页 |
| ·pDNOR222-cDNA重组子构建 | 第66-70页 |
| ·白背飞虱酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第70-71页 |
| ·白背飞虱酵母双杂交酵母文库菌株制备 | 第71-72页 |
| 2. 结果与分析 | 第72-74页 |
| ·白背飞虱总RNA | 第72页 |
| ·库容量鉴定 | 第72-74页 |
| ·文库库容量 | 第72-73页 |
| ·白背飞虱文库重组率、插入片段大小及多样性 | 第73-74页 |
| 3. 讨论 | 第74-77页 |
| 第五章 SRBSDV与白背飞虱基因互作研究 | 第77-90页 |
| 1 材料与方法 | 第78-80页 |
| ·材料 | 第78页 |
| ·方法 | 第78-80页 |
| ·引物设计与载体构建 | 第78-79页 |
| ·诱饵融合蛋白表达 | 第79页 |
| ·诱饵载体毒性和自激活试验 | 第79页 |
| ·Mating法 | 第79页 |
| ·共转化 | 第79-80页 |
| ·浸润 | 第80页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-87页 |
| ·P8融合蛋白在酵母中的表达检测 | 第80页 |
| ·诱饵载体pGBK-P8毒性和自激活检测 | 第80-81页 |
| ·文库筛选 | 第81-83页 |
| ·SRBSDV P8筛选到的克隆统计 | 第81-82页 |
| ·P8筛选到的阳性克隆的测序及分析 | 第82-83页 |
| ·SRBSDV P8与SfCarE在酵母中的互作 | 第83-84页 |
| ·SRBSDV P8与SfCarE在植物细胞中互作 | 第84-86页 |
| ·SfCarE与SRBSDV P8亚细胞定位分析 | 第86-87页 |
| 3 讨论 | 第87-90页 |
| 第六章 SRBSDV蛋白自身互作研究 | 第90-104页 |
| 1 材料与方法 | 第90-93页 |
| ·材料 | 第90-92页 |
| ·生物材料 | 第90-91页 |
| ·SRBSDV PCR引物 | 第91-92页 |
| ·方法 | 第92-93页 |
| ·Mating法 | 第92页 |
| ·共转化 | 第92页 |
| ·浸润 | 第92页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第92页 |
| ·免疫电镜 | 第92-93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-102页 |
| ·pGBK-P6筛选SRBSDV酵母双杂交cDNA文库结果 | 第93页 |
| ·SRBSDV P6与P9-1蛋白互作研究 | 第93-99页 |
| ·SRBSDV P6与P9-1蛋白在酵母中的互作 | 第93-94页 |
| ·SRBSDV P6与P9-1蛋白的互作结构域 | 第94-96页 |
| ·SRBSDV P6与P9-1在植物体内的互作 | 第96-97页 |
| ·P6和P9-1蛋白在植物体内的亚细胞定位 | 第97-99页 |
| ·SRBSDV P6蛋白自身互作研究 | 第99-102页 |
| ·SRBSDV P6蛋白自身互作 | 第99页 |
| ·SRBSDV P6蛋白自身互作结构域鉴定 | 第99-101页 |
| ·P6蛋白在植物体内的自身互作 | 第101-102页 |
| ·P6在水稻病株细胞中的免疫胶体金定位 | 第102页 |
| 3 小结与讨论 | 第102-104页 |
| 第七章 全文总结与进一步研究建议 | 第104-106页 |
| 1 全文总结 | 第104-105页 |
| 2 进一步研究建议 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-126页 |
| 附录Ⅰ | 第126-131页 |
| 附录Ⅱ | 第131-135页 |
| 附录Ⅲ | 第135-139页 |
| 致谢 | 第139-141页 |
| 作者简历 | 第141-142页 |
| 博士在读期间发表的论文情况 | 第142页 |
