| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第1章 绪论：RNA干扰介导染色质修饰 | 第14-34页 |
| ·引言 | 第14页 |
| ·不同类型的小RNA | 第14-15页 |
| ·裂殖酵母的染色质结构 | 第15-18页 |
| ·着丝粒周边重复区 | 第16页 |
| ·rDNA重复区 | 第16页 |
| ·端粒 | 第16-17页 |
| ·交配型位点 | 第17-18页 |
| ·裂殖酵母RNAi介导着丝粒异染色质组装的机制 | 第18-19页 |
| ·起始阶段 | 第18页 |
| ·效应阶段 | 第18页 |
| ·扩增阶段 | 第18-19页 |
| ·裂殖酵母中参与RNAi和异染色形成的重要蛋白质复合体和相关蛋白 | 第19-26页 |
| ·RITS效应复合物：RNAi induced silencing complex | 第19-21页 |
| ·RDRC复合体：RNA-directed RNA Polymerase Complex | 第21-22页 |
| ·CLRC复合体：clr4-rik1-cul4 complex | 第22-24页 |
| ·Stcl | 第24-25页 |
| ·Dicer | 第25-26页 |
| ·着丝粒重复区的转录和沉默需要RNA聚合酶Ⅱ | 第26页 |
| ·交配型位点和端粒处不依赖于RNAi的途径 | 第26-27页 |
| ·小结 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-34页 |
| 第2章 裂殖酵母蛋白Stc1的溶液结构 | 第34-74页 |
| ·引言 | 第34-38页 |
| ·实验材料与实验方法 | 第38-58页 |
| ·PCR扩增目的基因片段 | 第38-39页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段 | 第39-40页 |
| ·从琼脂糖凝胶上回收目的基因片段 | 第40页 |
| ·大肠杆菌质粒的纯化 | 第40-41页 |
| ·限制性双酶切 | 第41页 |
| ·酶切产物回收 | 第41页 |
| ·片段与载体的连接 | 第41-42页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·质粒转化到大肠杆菌感受态细胞 | 第42页 |
| ·菌落PCR鉴定,酶切鉴定及测序 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌扩大培养与IPTG诱导重组蛋白表达 | 第43页 |
| ·His-tag融合蛋白的亲和纯化 | 第43-44页 |
| ·透析和TEV酶切 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44-46页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第46页 |
| ·同位素标记蛋白质的表达 | 第46-47页 |
| ·蛋白质样品的冻干重溶 | 第47-48页 |
| ·核磁样品准备和记谱 | 第48页 |
| ·谱图处理 | 第48页 |
| ·化学位移指认 | 第48-50页 |
| ·核磁共振约束指认 | 第50-51页 |
| ·溶液结构计算 | 第51页 |
| ·RDC定向介质的制备 | 第51-53页 |
| ·主链弛豫常数的测定 | 第53-54页 |
| ·圆二色光谱CD | 第54页 |
| ·荧光偏振实验 | 第54-55页 |
| ·酵母双杂交实验检测两个蛋白的相互作用 | 第55-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-72页 |
| ·Stc1的结构域分布 | 第58-60页 |
| ·Stc1保守的N端保守区域溶液结构解析 | 第60-61页 |
| ·Stc1串联锌指结构域溶液结构的系综描述 | 第61-64页 |
| ·Stc1串联锌指结构域主链弛豫数据分析 | 第64-65页 |
| ·Stc1串联锌指结构域残留偶极耦合数据分析 | 第65-69页 |
| ·Stc1串联锌指结构域结构与LIM结构域的比较 | 第69-70页 |
| ·与英国实验室合作Stc1的功能研究 | 第70-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-74页 |
| 第3章 组蛋白的H3K36甲基化修饰 | 第74-98页 |
| ·组蛋白的共价修饰 | 第74-76页 |
| ·组蛋白H3K36的甲基化和NSD蛋白家族 | 第76-86页 |
| ·组蛋白甲基转移酶的特异性 | 第77页 |
| ·NSD1是H3K36单双甲基化酶 | 第77-79页 |
| ·NSD2是H3K36单双甲基化酶 | 第79-80页 |
| ·Set2三甲基化酶 | 第80-81页 |
| ·其他H3K36特异性的甲基转移酶 | 第81页 |
| ·影响H3K36甲基化的其他因子 | 第81-82页 |
| ·H3K36的甲基化与转录激活 | 第82-83页 |
| ·NSD酶和转录起始 | 第83页 |
| ·H3K36的甲基化与转录抑制 | 第83-84页 |
| ·H3K36的甲基化与疾病相关 | 第84-86页 |
| ·PHD与组蛋白识别 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 第4章 NSD3-PHD5C5HCH结构域结构与功能研究 | 第98-156页 |
| ·实验材料与实验方法 | 第98-104页 |
| ·边界选择 | 第98页 |
| ·LIC克隆 | 第98-100页 |
| ·定点突变 | 第100-101页 |
| ·蛋白质表达纯化 | 第101-102页 |
| ·离子交换纯化 | 第102页 |
| ·GST-NSD3-PHDSCH与小牛胸腺组蛋白的pull-down实验 | 第102-103页 |
| ·GST-NSD3-PHD5CH与组蛋白小肽的核磁滴定和ITC实验 | 第103-104页 |
| ·实验结果和讨论 | 第104-135页 |
| ·NSD3-PHD5C5HCH分子筛纯化 | 第104-105页 |
| ·NSD3-PHD5C5HCH离子交换纯化 | 第105-109页 |
| ·NSD-PHD5C5HCH结构域结合组蛋白相互作用的鉴定 | 第109-111页 |
| ·NSD3-PHD5C5HCH与H3尾巴相互作用的ITC | 第111-112页 |
| ·NSD3-PHD5C5HCH与H3尾巴相互作用的核磁滴定 | 第112-116页 |
| ·NSD3-PHD5C5HCH结构域的晶体筛选 | 第116-117页 |
| ·晶体数据的收集跟结构解析和修正 | 第117-122页 |
| ·NSD3-PHD5C5HCH结构分析 | 第122-123页 |
| ·NSD3-PHD5C5HCH与组蛋白H3尾巴复合物分析 | 第123-127页 |
| ·NSD家族PHD5C5HCH结构域识别组蛋白H3尾巴能力的差异 | 第127-128页 |
| ·NSD家族C5HCH结构域的功能 | 第128-130页 |
| ·NSD3-PHD5C5CH结构域与其他PHD结构域的比较 | 第130-135页 |
| ·小结 | 第135-139页 |
| 参考文献 | 第139-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第157页 |
