| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-29页 |
| ·结核分枝杆菌及其危害 | 第11-13页 |
| ·结核分枝杆菌 | 第11-12页 |
| ·结核分枝杆菌的危害 | 第12-13页 |
| ·结核分枝杆菌中的DNA修复 | 第13-15页 |
| ·真核生物的NHEJ | 第15-18页 |
| ·真核中蛋白组成和互作 | 第16页 |
| ·真核NHEJ修复机制 | 第16-18页 |
| ·原核生物的NHEJ | 第18-22页 |
| ·Ku蛋白 | 第19-20页 |
| ·LigD蛋白 | 第20-22页 |
| ·POL结构域 | 第21页 |
| ·LIG结构域 | 第21页 |
| ·PE结构域 | 第21-22页 |
| ·结核分枝杆菌中的NHEJ | 第22-25页 |
| ·蛋白质的乙酰化修饰 | 第25页 |
| ·基因敲除原理 | 第25-28页 |
| ·研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-43页 |
| ·材料 | 第29-33页 |
| ·质粒与菌株 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要溶液 | 第30-32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-43页 |
| ·目的片断的克隆 | 第33-36页 |
| ·构建pZY73质粒的目的基因片段 | 第33-34页 |
| ·构建pZY75质粒的目的基因片段 | 第34-35页 |
| ·构建pZY91质粒的目的基因片段 | 第35-36页 |
| ·电转质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·p1NIL与pGOAL质粒的制备 | 第36-37页 |
| ·p1NIL质粒的酶切 | 第37页 |
| ·目的片段与酶切后的p1NIL连接 | 第37页 |
| ·p1NIL-目的片段重组质粒的转化 | 第37-38页 |
| ·PacⅠ酶切重组质粒与pGOAL质粒 | 第38页 |
| ·pGOAL质粒与p1NIL-target gene的连接 | 第38页 |
| ·电转质粒载体的转化 | 第38页 |
| ·基因敲除 | 第38-40页 |
| ·感受态的制备 | 第38-39页 |
| ·质粒的预处理 | 第39页 |
| ·电转 | 第39-40页 |
| ·第二次筛选 | 第40页 |
| ·突变体阳性检测 | 第40-43页 |
| ·PCR验证第二次筛选 | 第40页 |
| ·Western Blot验证 | 第40-41页 |
| ·M.smegmatis ku-his菌株中的Ku-His蛋白纯化 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白纯度和分子量 | 第42页 |
| ·NHEJ效率检测 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-51页 |
| ·目的片段的构建 | 第43-44页 |
| ·pZY73质粒的目的基因片段 | 第43页 |
| ·pZY75质粒的目的基因片段 | 第43-44页 |
| ·pZY91质粒的目的基因片段 | 第44页 |
| ·p1NIL与pGOAL质粒的酶切 | 第44-45页 |
| ·pZY73、pZY75与pZY91质粒酶切验证 | 第45-46页 |
| ·碱处理的条件 | 第46-47页 |
| ·第二次筛选 | 第47页 |
| ·第二次筛选后菌落PCR验证 | 第47-48页 |
| ·第二次筛选后菌落Western Blot验证 | 第48-49页 |
| ·M smegmatis mc~2 155 ku-his菌株的Ku-His蛋白的大量纯化 | 第49页 |
| ·NHEJ修复效率检测 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
