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应用SELEX技术体外筛选PRRSV核衣壳蛋白的DNA适配子

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略语表(ABBREVIATION)第10-11页
第一章 文献综述第11-24页
   ·PRRSV目前研究进展第11-12页
   ·SELEX技术和适配子第12-24页
     ·SELEX基本原理第13-14页
     ·初始随机核苷酸文库第14-16页
     ·靶物质第16-17页
     ·筛选过程第17-18页
     ·次级文库生成第18页
     ·克隆和序列分析第18-19页
     ·特异性和亲和性分析第19页
     ·适配子修饰第19-20页
     ·SELEX技术和适配子的优缺点第20-21页
     ·适配子应用及前景第21-24页
第二章 研究目的和意义第24-25页
第三章 材料与方法第25-37页
   ·实验材料第25-29页
     ·载体与质粒第25-26页
     ·工具酶与主要试剂第26页
     ·主要缓冲液与相关试剂及其配制第26-29页
   ·实验方法第29-37页
     ·PRRSV核衣壳蛋白的表达与纯化第29页
     ·初始随机文库的构建及引物合成第29-30页
     ·初始文库通过PCR扩增成双链库第30页
     ·琼脂糖凝胶电泳第30-31页
     ·双链文库的回收第31页
     ·不对称PCR扩增ssDNA文库或生物素标记的ssDNA文库第31-32页
     ·单链适配子文库的回收第32页
     ·N蛋白的ssDNA适配子筛选过程第32-33页
     ·ssDNA亚库亲和性测定第33-34页
     ·筛选产物的克隆及鉴定第34-35页
     ·测序及序列分析第35页
     ·适配子亲和性和特异性第35页
     ·适配子与PRRSV N蛋白的剂量依赖关系的确定第35-36页
     ·适配子与PRRSV之间相互作用的鉴定第36-37页
第四章 结果与分析第37-48页
   ·PRRSV核衣壳蛋白的表达纯化第37页
   ·适配子初始文库的构建及鉴定第37-38页
   ·双链文库的生成及回收第38-39页
   ·单链文库的生成及回收第39-40页
   ·适配子亚库亲和力测定第40页
   ·筛选产物的克隆第40-42页
   ·测序第42页
   ·序列分析第42-44页
     ·序列比对及碱基组成分析第42-43页
     ·二级结构分析第43-44页
   ·适配子与N蛋白亲和性分析第44-45页
   ·抗原依赖性第45-46页
   ·特异性分析第46页
   ·适配子与PRRSV亲和性鉴定第46-48页
第五章 讨论与结论第48-51页
   ·讨论第48-50页
     ·PRRSV N蛋白的纯化第48页
     ·初始随机寡聚核苷酸文库构建及引物设计第48页
     ·次级文库的生成第48-49页
     ·筛选过程第49页
     ·适配子序列分析第49-50页
     ·适配子亲和性和特异性分析第50页
     ·适配子检测病毒分析第50页
   ·结论第50-51页
参考文献第51-57页
附录第57-59页
致谢第59页

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