| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·GRP78的分布及生物学功能 | 第13-17页 |
| ·内质网GRP78及功能 | 第13-14页 |
| ·胞浆GRP78及功能 | 第14页 |
| ·线粒体中GRP78及功能 | 第14页 |
| ·细胞核中GRP78及功能 | 第14-15页 |
| ·肿瘤细胞表面的GRP78 | 第15-16页 |
| ·肿瘤细胞分泌的GRP78 | 第16-17页 |
| ·GRP78与肿瘤进程研究进展 | 第17-23页 |
| ·实体瘤的进程需要GRP78的表达 | 第17-18页 |
| ·GRP78促进肿瘤生长的机制研究 | 第18-19页 |
| ·GRP78与肿瘤微环境 | 第19-21页 |
| ·靶向GRP78敏化肿瘤治疗 | 第21页 |
| ·GRP78与肿瘤微环境中异常能量代谢的关系 | 第21-22页 |
| ·GRP78与肿瘤发生时Wnt信号通路激活相关 | 第22-23页 |
| ·本研究目的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 结肠癌分泌型GRP78的检测及GST-GRP78的获得 | 第25-32页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·菌株、质粒与细胞株 | 第25页 |
| ·试剂及抗体 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·细胞的培养 | 第26-27页 |
| ·细胞培养液蛋白提取及Western blot | 第27页 |
| ·大肠杆菌DH5a、BL21感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·细胞总RNA提取及逆转录 | 第27-28页 |
| ·质粒的转化 | 第28页 |
| ·pGEX-4T-2-GRP78重组质粒的构建 | 第28页 |
| ·工程菌pGEX-4T-2-GRP78 BL21的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·GST-GRP78融合蛋白的纯化 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-31页 |
| ·结肠癌细胞系中分泌型GRP78的检测 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-2-GRP78的构建 | 第30页 |
| ·融合蛋白pGEX-4T-2-GRP78的表达纯化 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 分泌型GRP78生物学活性研究 | 第32-36页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·细胞株 | 第32页 |
| ·试剂及抗体 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-33页 |
| ·MTT测定细胞增殖 | 第32-33页 |
| ·细胞划痕实验测定细胞迁移 | 第33页 |
| ·Western blotting | 第33页 |
| ·统计学分析 | 第33页 |
| ·实验结果 | 第33-35页 |
| ·分泌型GRP78促进肠癌细胞的增殖 | 第33-34页 |
| ·分泌型GRP78对肠癌细胞迁移的影响 | 第34页 |
| ·GRP78上调p-Akt表达水平 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 分泌型GRP78促进肠癌细胞增殖的分子机制研究 | 第36-45页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·细胞株 | 第36页 |
| ·试剂及抗体 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| ·LY294002抑制PI3K信号通路的细胞模型建立 | 第37页 |
| ·细胞膜蛋白提取 | 第37页 |
| ·GST免疫沉淀实验 | 第37-38页 |
| ·硝酸银染色及质谱鉴定 | 第38页 |
| ·非变性蛋白胶 | 第38页 |
| ·免疫荧光染色 | 第38页 |
| ·抗体封闭实验 | 第38页 |
| ·Western blotting | 第38页 |
| ·统计学分析 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-42页 |
| ·分泌型GRP78的细胞表面受体寻找 | 第39-40页 |
| ·分泌型GRP78细胞表面受体是细胞表面GRP78 | 第40-41页 |
| ·GRP78-GRP78相互作用对PI3K信号通路的影响 | 第41页 |
| ·GRP78-GRP78相互作用对Wnt信号通路的影响 | 第41-42页 |
| ·GRP78-GRP78相互作用对丙酮酸激酶的影响 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第51-53页 |
| 附录1 英文缩略语表 | 第53-54页 |
| 附录2 主要试剂配方 | 第54-55页 |
| 附录3 实验主要仪器设备 | 第55-56页 |
| 附录4 基因测序报告 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 个人简况及联系方式 | 第58-60页 |
