| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-18页 |
| 1. 胆固醇与甾醇载体蛋白 | 第11-15页 |
| ·胆固醇的重要性 | 第11页 |
| ·胆固醇的吸收转运方式 | 第11-12页 |
| ·脊椎动物与昆虫胆固醇代谢及甾醇载体蛋白的区别 | 第12-13页 |
| ·甾醇载体蛋白2(SCP-2) | 第13-15页 |
| 2. 蚊子SCP-2抑制剂 | 第15-16页 |
| 3. 研究目的及意义 | 第16-18页 |
| 第二章 棉铃虫甾醇载体蛋白-2基因的克隆 | 第18-40页 |
| 1. 材料 | 第18-21页 |
| ·实验动物 | 第18-19页 |
| ·菌株和载体 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19-20页 |
| ·实验中用到引物的名称及引物序列 | 第20-21页 |
| ·仪器 | 第21页 |
| 2. 方法 | 第21-31页 |
| ·棉铃虫甾醇载体蛋白-X(HaSCP-X)基因中间片段克隆 | 第21-27页 |
| ·棉铃虫甾醇载体蛋白-X(HaSCP-X)基因3’端克隆 | 第27-28页 |
| ·棉铃虫甾醇载体蛋白-X(HaSCP-X)基因5’端克隆 | 第28-31页 |
| ·HaSCP-X基因cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| ·用 S.N.A.P. Column 纯化 cDNA | 第29-30页 |
| ·cDNA 链 dCTP 加尾 | 第30页 |
| ·HaSCPX基因靠近5’端部分基因序列的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·HaSCP-X基因5，端基因序列的PCR扩增 | 第31页 |
| 3. 结果 | 第31-38页 |
| ·HaSCP-x/SCP-2基因序列 | 第31-33页 |
| ·HaSCP-x/2氨基酸序列系统发育分析 | 第33-34页 |
| ·HaSCP-x/2蛋白信号肽酶切位点预测 | 第34页 |
| ·HaSCP-x/2蛋白三级结构预测 | 第34-35页 |
| ·不同物种HaSCP-x/2蛋白三级结构比较 | 第35-38页 |
| 4. 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 棉铃虫甾醇载体蛋白-2(HASCP-2)基因重组表达及HASCP-2蛋白在幼虫体内的定位 | 第40-59页 |
| 1. 材料 | 第40-42页 |
| ·载体 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40-42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| 2. 方法 | 第42-48页 |
| ·重组表达质粒HaSCP-2/pMAL-c2x的构建 | 第42-46页 |
| ·TEV蛋白酶的纯化 | 第46-47页 |
| ·HaSCP-2蛋白多克隆抗体的制备 | 第47页 |
| ·HaSCP-2蛋白多克隆抗体的western blot检测 | 第47页 |
| ·幼虫中HaSCP-2蛋白的免疫组织化学 | 第47-48页 |
| 3. 结果 | 第48-57页 |
| ·利用载体pMAL-c2x纯化HaSCP-2蛋白 | 第48-50页 |
| ·利用载体PET28a纯化HaSCP-2蛋白 | 第50-52页 |
| ·利用实验室改造载体pMAL-p2x-TEV纯化HaSCP-2蛋白 | 第52-54页 |
| ·HaSCP-2蛋白在幼虫体内的定位 | 第54-57页 |
| 4. 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 棉铃虫甾醇载体蛋白-X/2(HASCP-X/2)在幼虫不同龄期不同组织中的表达 | 第59-71页 |
| 1. 材料 | 第59-60页 |
| ·实验动物 | 第59-60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·仪器 | 第60页 |
| 2. 方法 | 第60-63页 |
| ·实验动物的处理 | 第60页 |
| ·模板cDNA的合成 | 第60-61页 |
| ·实时荧光定量PCR反应体系 | 第61-62页 |
| ·实时荧光定量PCR反应条件 | 第62-63页 |
| ·棉铃虫五龄第三天幼虫不同组织总蛋白的提取 | 第63页 |
| 3. 结果 | 第63-69页 |
| ·荧光定量PCR产物特异性分析 | 第63-64页 |
| ·标准曲线对反应的评估 | 第64-66页 |
| ·棉铃虫不同龄期不同组织中HaSCP-x/2转录子的相对定量 | 第66-67页 |
| ·HaSCP-x/2在棉铃虫整个龄期的表达情况 | 第67-68页 |
| ·棉铃虫五龄第三天不同组织中SCP-2蛋白的免疫检测 | 第68-69页 |
| 4. 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 DSRNA干扰HASCP-X/2转录子对棉铃虫幼虫胆固醇吸收和生长发育的影响 | 第71-78页 |
| 1. 材料 | 第71页 |
| ·实验动物 | 第71页 |
| ·试剂 | 第71页 |
| ·仪器 | 第71页 |
| 2. 方法 | 第71-74页 |
| ·HaSCP-2 dsRNA的体外合成 | 第71-73页 |
| ·HaSCP-2 dsRNA的活体注射 | 第73页 |
| ·RNA干扰后HaSCP-2表达水平检测 | 第73页 |
| ·RNA干扰HaSCP-2基因表达后胆固醇含量的测定 | 第73-74页 |
| 3. 结果 | 第74-76页 |
| ·RNA干扰效果检测 | 第74页 |
| ·RNA干扰对脂肪体中胆固醇含量的影响 | 第74-75页 |
| ·RNA干扰对幼虫化蛹及成虫产卵量的影响 | 第75-76页 |
| 4. 讨论 | 第76-78页 |
| 第六章 SCP-2蛋白抑制剂对棉铃虫生物活性测定 | 第78-101页 |
| 1. 材料 | 第78页 |
| ·实验动物 | 第78页 |
| ·试剂 | 第78页 |
| 2. 方法 | 第78-80页 |
| 3. 结果 | 第80-98页 |
| ·埃及伊蚊SCP-2抑制剂对棉铃虫幼虫致死效果 | 第80-90页 |
| ·埃及伊蚊SCP-2抑制剂对棉铃虫幼虫的半致死剂量 | 第90-91页 |
| ·埃及伊蚊SCP-2抑制剂对棉铃虫幼虫体重的影响 | 第91-94页 |
| ·埃及伊蚊SCP-2抑制剂对棉铃虫产卵量及卵孵化率的影响 | 第94-98页 |
| 4. 讨论 | 第98-101页 |
| 参考文献 | 第101-108页 |
| 附录 | 第108-114页 |
| 发表文章目录 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
