| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1 Purα研究进展概述 | 第11-13页 |
| ·Purα结构 | 第11页 |
| ·Purα功能 | 第11-13页 |
| ·Purα参与 DNA 复制和调控转录 | 第12页 |
| ·Purα参与 mRNA 的转运和翻译 | 第12-13页 |
| ·Purα与 DNA 修复 | 第13页 |
| 2 SET9 的研究进展概述 | 第13-18页 |
| ·组蛋白赖氨酸甲基转移酶的结构 | 第14-15页 |
| ·SET9 的功能 | 第15-16页 |
| ·SET9 甲基化的生物反应 | 第16-18页 |
| 3 p53 研究进展 | 第18-21页 |
| ·p53 的结构 | 第18-19页 |
| ·p53 的功能 | 第19-21页 |
| ·p53 参与细胞周期的阻滞 | 第19-20页 |
| ·p53 参与细胞凋亡 | 第20页 |
| ·p53 参与 DNA 损伤修复 | 第20-21页 |
| 4 酵母双杂交技术概述 | 第21-23页 |
| ·酵母双杂交技术的原理 | 第21-22页 |
| ·酵母双杂交技术的应用 | 第22-23页 |
| 5 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 研究 DNA 损伤情况下 Purα对 p53 蛋白甲基化的影响 | 第24-42页 |
| 1 前言 | 第24页 |
| 2 实验材料 | 第24-27页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第24-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·生物材料 | 第26页 |
| ·分析软件 | 第26页 |
| ·主要溶液配制 | 第26-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-34页 |
| ·构建 pIRES-Flag-Purα融合蛋白表达载体 | 第27-30页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·制备感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·扩增 Purα基因片段 | 第28页 |
| ·PCR 产物回收 | 第28页 |
| ·EcoR I 单酶切 | 第28-29页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第29页 |
| ·连接 | 第29页 |
| ·转化 | 第29-30页 |
| ·双酶切鉴定 | 第30页 |
| ·测序鉴定 | 第30页 |
| ·筛选稳定表达 Purα蛋白的 293T 细胞 | 第30-31页 |
| ·细胞培养 | 第30页 |
| ·pIRES-Flag-Purα质粒扩增 | 第30-31页 |
| ·细胞转染 | 第31页 |
| ·抗生素筛选稳定株 | 第31页 |
| ·免疫印迹（Western Blot） | 第31-32页 |
| ·免疫沉淀（Immunoprecipitation） | 第32-33页 |
| ·细胞内蛋白免疫荧光定位 | 第33-34页 |
| ·玻片包被 | 第33页 |
| ·接种细胞 | 第33页 |
| ·激光共聚焦扫描显微镜样品制备 | 第33-34页 |
| 4 实验结果 | 第34-40页 |
| ·pIRES-Flag-Purα载体构建 | 第34页 |
| ·稳定表达 Purα蛋白 293T 细胞的筛选与鉴定 | 第34-36页 |
| ·稳定表达 Purα对 p53 蛋白甲基化的影响结果 | 第36-37页 |
| ·不同时间阿霉素处理 p53 蛋白的影响结果 | 第37-38页 |
| ·稳定表达 Purα蛋白对于 p53 蛋白乙酰化的影响结果 | 第38-39页 |
| ·Purα和 SET9 蛋白在细胞内定位结果 | 第39-40页 |
| 5 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 Purα和 SET9 酵母双杂交载体的构建 | 第42-56页 |
| 1 实验材料 | 第42-45页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第42-43页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·生物材料 | 第43页 |
| ·主要溶液配制 | 第43-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-51页 |
| ·AD、BD 重组质粒构建 | 第45-48页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·扩增 Purα基因片段 | 第45-46页 |
| ·PCR 产物回收 | 第46页 |
| ·Nde I 和 BamH I 单酶切 | 第46-47页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第47页 |
| ·连接 | 第47页 |
| ·感受态细胞制备 | 第47页 |
| ·转化 | 第47-48页 |
| ·PCR 鉴定 | 第48页 |
| ·双酶切鉴定 | 第48页 |
| ·测序鉴定 | 第48页 |
| ·重组质粒的在酵母中的表达及鉴定 | 第48-51页 |
| ·醋酸锂介导的酵母转化方法 | 第48-49页 |
| ·酵母感受态细胞电转化方法 | 第49-50页 |
| ·酵母质粒提取 | 第50页 |
| ·PCR 鉴定 | 第50页 |
| ·免疫印迹实验（Werstern Blot）鉴定 | 第50-51页 |
| 3 实验结果 | 第51-54页 |
| ·AD、BD 重组质粒构建 | 第51-53页 |
| ·AD、BD 重组在酵母菌株中表达的鉴定 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 结论与展望 | 第56-57页 |
| 1 结论 | 第56页 |
| 2 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 发表论文情况 | 第66页 |
