| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 缩略语 | 第14-15页 |
| 第一章 研究背景 | 第15-23页 |
| 1 人生长激素的研究进展 | 第15-20页 |
| ·hGH 的背景介绍 | 第15页 |
| ·hGH 的各种存在形式及其亚型 | 第15-16页 |
| ·hGH 的分子结构 | 第16-17页 |
| ·hGH 的生理功能及其应用 | 第17-20页 |
| ·促进生长发育 | 第18页 |
| ·促进蛋白质的合成 | 第18页 |
| ·调节脂肪代谢 | 第18-19页 |
| ·影响体内糖代谢 | 第19页 |
| ·调节水、矿物质代谢 | 第19页 |
| ·影响能量代谢 | 第19页 |
| ·延缓衰老作用 | 第19-20页 |
| ·生长激素治疗的副作用 | 第20页 |
| 2 人生长激素类似蛋白的发现 | 第20-22页 |
| ·脊椎动物中 hGH-like 蛋白的发现 | 第21页 |
| ·无脊椎动物中 hGH-like 蛋白的发现 | 第21-22页 |
| 3 展望 | 第22-23页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第23-25页 |
| 1 研究目的和意义 | 第23页 |
| 2 研究内容 | 第23-24页 |
| 3 实验流程图 | 第24-25页 |
| 第三章 蚕蛹中天然 HGH-LIKE 蛋白的纯化 | 第25-36页 |
| 1 材料与试剂 | 第25-27页 |
| ·材料与仪器 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-27页 |
| 2 方法 | 第27-31页 |
| ·蚕蛹样品的预处理 | 第27页 |
| ·匀浆 | 第27页 |
| ·离心 | 第27页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第27页 |
| ·hGH-like 蛋白的初步分离 | 第27-28页 |
| ·BCA 法蛋白定量 | 第28页 |
| ·初步分离后家蚕蛹蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第28页 |
| ·免疫印迹检测 hGH-like 蛋白分布 | 第28-30页 |
| ·Western Blots 检测 | 第28-29页 |
| ·Dot Blots 检测 | 第29-30页 |
| ·亲和层析纯化 hGH-like 蛋白 | 第30-31页 |
| ·亲和层析柱的制备 | 第30页 |
| ·偶联效率的测定 | 第30页 |
| ·亲和纯化 hGH-like 蛋白 | 第30-31页 |
| ·亲和纯化后蛋白样品的 SDS-PAGE 检测 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-34页 |
| ·家蚕蛹蛋白的初步分离 | 第31页 |
| ·初步分离后家蚕蛹蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第31-32页 |
| ·Western Blots 及 Dot Blots 检测结果 | 第32-33页 |
| ·亲和层析后蛋白样品的 SDS-PAGE 分析 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 双向电泳和质谱分析 | 第36-44页 |
| 1 材料与试剂 | 第36-38页 |
| ·材料与仪器 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·主要试剂的配制 | 第36-38页 |
| 2 方法 | 第38-40页 |
| ·双向电泳 | 第38-40页 |
| ·第一项 IEF 等电聚焦 | 第38-39页 |
| ·第二向 SDS-PAGE 电泳 | 第39页 |
| ·凝胶固定及显色 | 第39-40页 |
| ·取点胶内酶解 | 第40页 |
| ·质谱分析 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-43页 |
| ·双向电泳 | 第40-41页 |
| ·质谱分析结果 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 生物信息学分析 | 第44-51页 |
| 1 生物信息学工具 | 第44页 |
| 2 结果 | 第44-49页 |
| ·蛋白质的疏水性预测 | 第44-45页 |
| ·hGH-like 蛋白信号肽预测 | 第45-47页 |
| ·hGH-like 蛋白定位的预测 | 第47页 |
| ·氨基酸序列比对 | 第47-48页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第48-49页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 第六章 HGH-LIKE 基因的克隆与表达 | 第51-62页 |
| 1 材料与试剂 | 第51-53页 |
| ·材料与仪器 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·主要试剂的配制 | 第51-53页 |
| 2 方法 | 第53-58页 |
| ·分子克隆实验设计 | 第53页 |
| ·hGH-like2 基因的克隆 | 第53-55页 |
| ·目的基因的扩增 | 第53-54页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第54页 |
| ·PCR 产物与转移载体 pFastBac1-ph 的双酶切 | 第54页 |
| ·酶切产物处理及回收 | 第54页 |
| ·连接反应 | 第54-55页 |
| ·E.coli TG1 和 DH10Bac 感受态细胞的制备 | 第55页 |
| ·连接产物的转化 | 第55页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第55页 |
| ·挑斑 | 第55页 |
| ·质粒的小量制备 | 第55页 |
| ·PCR 鉴定 | 第55页 |
| ·重组 Bacmid-ph -hGH-like2 的构建与鉴定 | 第55-58页 |
| ·重组质粒转化 DH10Bac | 第55-56页 |
| ·重组 Bacmid 的提取 | 第56页 |
| ·重组 Bacmid PCR 鉴定 | 第56-57页 |
| ·脂质体介导法转染家蚕 BmN 细胞 | 第57-58页 |
| ·BmN 细胞的复苏和培养 | 第57页 |
| ·脂质体介导转染家蚕 BmN 细胞 | 第57页 |
| ·重组病毒的获得及 PCR 鉴定 | 第57-58页 |
| ·SDS-PAGE 和 Western Blots 鉴定 hGH-like 蛋白在家蚕细胞中的表达 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-61页 |
| ·hGH-like2 基因的扩增 | 第58页 |
| ·重组质粒 pFastBac1-ph-hGH-like2 的 PCR 及酶切鉴定 | 第58-59页 |
| ·序列测定 | 第59页 |
| ·发病 BmN 细胞的鉴定 | 第59-60页 |
| ·家蚕细胞中 hGH-like2 蛋白的 SDS-PAGE 和 Western Blots 鉴定 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 第七章 HGH-LIKE 蛋白的功能研究 | 第62-73页 |
| 1 材料与试剂 | 第62-63页 |
| ·材料与仪器 | 第62页 |
| ·试剂 | 第62页 |
| ·主要试剂的配制 | 第62-63页 |
| 2 方法 | 第63-66页 |
| ·天然 hGH-like 蛋白体外检测对 k562 细胞的促生长作用 | 第63-64页 |
| ·k562 细胞的复苏和培养 | 第63页 |
| ·天然 hGH-like 促 k562 细胞生长实验 | 第63-64页 |
| ·天然 hGH-like 蛋白对家蚕 BmN 细胞生长的研究 | 第64-65页 |
| ·BmN 细胞的复苏和培养 | 第64页 |
| ·MTT 法检测 hGH-like 对 BmN 细胞生长的影响 | 第64页 |
| ·流式检测 hGH-like2 蛋白对家蚕 BmN 细胞生长周期的影响 | 第64-65页 |
| ·天然 hGH-like 蛋白在蚕蛹中的组织定位 | 第65页 |
| ·冷冻切片的制作 | 第65页 |
| ·免疫荧光染色 | 第65页 |
| ·天然 hGH-like 蛋白在小鼠体内的代谢研究 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-71页 |
| ·k562 细胞克隆实验 | 第66-67页 |
| ·天然 hGH-like 蛋白对家蚕 BmN 细胞生长的研究 | 第67-68页 |
| ·流式分析 hGH-like2 蛋白对家蚕 BmN 细胞生长周期的影响 | 第68-69页 |
| ·天然 hGH-like 蛋白在蚕蛹中的分布情况 | 第69-70页 |
| ·小鼠体内的代谢情况分析 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 研究生期间论文发表情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
