| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-24页 |
| ·研究背景和选题意义 | 第18-23页 |
| ·虾红素家族金属蛋白酶 | 第18-19页 |
| ·孵化酶的的纯化与生化性质 | 第19页 |
| ·孵化酶的基因的时空表达特征 | 第19-21页 |
| ·孵化酶的基因结构与进化关系 | 第21-22页 |
| ·家蚕孵化酶的研究价值与应用前景 | 第22-23页 |
| ·本文的主要研究内容 | 第23-24页 |
| 第2章 家蚕孵化酶基因Ⅱ(BmHELⅡ)的分子克隆与特性分析 | 第24-48页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料与方法 | 第24-37页 |
| ·材料与试剂 | 第24页 |
| ·常用试剂和缓冲液的配制 | 第24-26页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第26页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第26-27页 |
| ·BmHELⅡ局部序列的电子克隆 | 第27页 |
| ·特异性引物的设计 | 第27-28页 |
| ·总RNA提取 | 第28-29页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第29-30页 |
| ·PCR验证 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶的制备与电泳 | 第30-31页 |
| ·玻璃奶回收DNA | 第31页 |
| ·连接反应 | 第31页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第31-32页 |
| ·碱裂解法少量提取质粒DNA | 第32页 |
| ·重组质粒DNA的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·甘油菌的制备及序列测定 | 第33页 |
| ·3’RACE扩增BmHELⅡ基因3’端序列 | 第33-35页 |
| ·生物信息学预测BmHELⅡ基因5’端序列 | 第35页 |
| ·BmHELⅡ基因ORF序列的克隆 | 第35页 |
| ·生物信息学分析 | 第35页 |
| ·BmHELⅡ蛋白三级结构的预测 | 第35-36页 |
| ·BmHELⅡ基因转录本在家蚕不同发育期的半定量RT-PCR分析 | 第36页 |
| ·BmHELⅡ基因在幼虫不同组织中的表达谱 | 第36页 |
| ·BmHELⅡ基因在家蚕不同发育时期精巢中的相对表达量 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-45页 |
| ·BmHELⅡcDNA全长序列 | 第37-39页 |
| ·BmHELⅡ的基因结构 | 第39页 |
| ·同源比对与进化分析 | 第39-41页 |
| ·BmHELⅡ蛋白的三维结构 | 第41-43页 |
| ·BmHELⅡ在不同发育期胚胎及孵化后的幼虫中的相对表达量 | 第43-44页 |
| ·BmHELⅡ在幼虫不同组织的表达谱 | 第44页 |
| ·BmHELⅡ在家蚕不同发育时期精巢中的相对表达量 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第3章 BmHELⅡ的原核表达与酶活分析 | 第48-60页 |
| ·前言 | 第48页 |
| ·材料与方法 | 第48-55页 |
| ·材料与试剂 | 第48-49页 |
| ·常用试剂和缓冲液的配制 | 第49-51页 |
| ·原核表达重组质粒pET28a-BmHELⅡ的构建 | 第51页 |
| ·BmHELⅡ的原核表达及蛋白样品的制备 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第52页 |
| ·蛋白胶的染色和脱色 | 第52页 |
| ·转膜 | 第52-53页 |
| ·Western Blot | 第53页 |
| ·BmHELⅡ蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·BmHELⅡ蛋白的复性 | 第54页 |
| ·家蚕卵壳底物的制备 | 第54页 |
| ·酶活性测定 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-58页 |
| ·表达载体pET28a-BmHELⅡ的构建 | 第55页 |
| ·BmHELⅡ的表达、纯化与复性 | 第55-57页 |
| ·BmHELs活性测定 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第4章 家蚕孵化酶基因启动子的克隆与特性分析 | 第60-72页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·材料与方法 | 第61-65页 |
| ·材料与试剂 | 第61页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第61页 |
| ·引物设计 | 第61页 |
| ·启动子BmHELp与BmHELⅡp的克隆 | 第61-62页 |
| ·BmHELp与BmHELⅡp的生物信息学分析 | 第62页 |
| ·报告质粒pGEM3Z-BmHELp/BmHELⅡp-luc的构建 | 第62-63页 |
| ·家蚕细胞培养与转染 | 第63-64页 |
| ·瞬时表达活性测定分析 | 第64-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-69页 |
| ·家蚕基因组DNA的提取 | 第65页 |
| ·启动子BmHELp与BmHELⅡp的克隆与鉴定 | 第65-66页 |
| ·启动子BmHELp与BmHELⅡp的生物信息学分析 | 第66-68页 |
| ·报告质粒pGEM3Z-BmHELp/BmHELⅡp-luc的构建与鉴定 | 第68-69页 |
| ·启动子BmHELp，BmHELⅡp细胞水平的活性分析 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 第5章 不同孵化率的家蚕品种与镇江野蚕BmHEL基因启动子的克隆与比较分析 | 第72-78页 |
| ·前言 | 第72页 |
| ·实验材料与方法 | 第72-73页 |
| ·家蚕品种 | 第72-73页 |
| ·其他实验材料 | 第73页 |
| ·多品种家蚕及野蚕启动子HELps的克隆 | 第73页 |
| ·HELps的多序列比对与分析 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| ·本章小结 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 详细摘要 | 第89-94页 |
