中文摘要 | 第1-12页 |
ABSTRACT | 第12-14页 |
符号说明 | 第14-16页 |
第一章 绪论 | 第16-33页 |
·糖抗原 | 第17-18页 |
·ABO血型抗原 | 第17页 |
·肿瘤糖抗原 | 第17-18页 |
·细菌细胞生物多糖及其生物合成 | 第18-21页 |
·细菌细胞表面多糖的种类 | 第18-20页 |
·细菌多糖的生物合成 | 第20-21页 |
·糖基转移酶的介绍 | 第21-29页 |
·分类与机理 | 第22-23页 |
·原核来源的α1,2-岩藻糖基转移酶 | 第23-29页 |
·结构性均一的寡糖的合成 | 第29-33页 |
·寡糖的化学合成 | 第29-31页 |
·寡糖的酶法合成 | 第31-33页 |
第二章 实验材料和仪器 | 第33-36页 |
·实验材料 | 第33-34页 |
·实验所用的载体和菌株 | 第33页 |
·培养基和溶液 | 第33-34页 |
·实验所用的试剂与耗材 | 第34-35页 |
·实验仪器 | 第35-36页 |
第三章 实验方法 | 第36-45页 |
·pET15b-HmFucT在E.coli DE3(BL21)中的表达 | 第36-39页 |
·雪貂螺杆菌来源的HmFucT基因的优化合成 | 第36页 |
·pET15b-HmFucT载体的构建 | 第36-38页 |
·pET15b-HmFucT蛋白的表达纯化 | 第38-39页 |
·重组蛋白pET15b-HmFucT的Western-Blot分析 | 第39页 |
·pGEX-4-1-HmFucT在Ecoli DE3(BL21)中的表达 | 第39-43页 |
·pGEX-4-1-HmFucT载体的构建 | 第39-41页 |
·pGEX-4-1-HmFucT的蛋白表达纯化 | 第41-43页 |
·HmFucT活性的鉴定 | 第43-45页 |
·TLC检测HmFucT岩藻糖基转移酶的活性 | 第43页 |
·金属离子对HmFucT的影响 | 第43-44页 |
·酶法合成岩藻糖基化的产物以及产物的分析 | 第44-45页 |
第四章 结果与分析 | 第45-55页 |
·HmFucT蛋白的基本性质及蛋白可溶性的预测 | 第45-46页 |
·HmFucT与原核来源的α1,2岩藻糖基转移酶的序列比对 | 第46页 |
·pET15b-HmFucT在E.coli DE3(BL21)中的表达 | 第46-48页 |
·pET15b-HmFucT载体的构建及蛋白纯化 | 第46-47页 |
·pET15b-HmFucT的诱导表达随时间的变化 | 第47页 |
·重组蛋白pET15b-HmFucT的纯化 | 第47-48页 |
·重组蛋白pET15b-HmFucT的Western-Blot分析 | 第48页 |
·pGEX-4-1-HmFucT在E.coli DE3(BL21)中的表达 | 第48-50页 |
·pGEX-4-1-HmFucT载体的构建 | 第48-49页 |
·pGEX-4-1-HmFucT诱导表达随时间的变化 | 第49-50页 |
·重组蛋白pGEX-4T-1-HmFucT的蛋白纯化 | 第50页 |
·HmFucT活性的鉴定 | 第50-55页 |
·金属离子对HmFucT的影响 | 第50-51页 |
·LC-MS检测岩藻糖基转移酶的活性 | 第51-52页 |
·TLC/MS检测HmFucT的底物特异性 | 第52页 |
·酶法合成岩藻基化寡糖以及产物鉴定 | 第52-55页 |
第五章 讨论 | 第55-58页 |
全文总结 | 第58-59页 |
附录与附图 | 第59-66页 |
1. 质粒图谱 | 第60-62页 |
2. 岩藻糖基化lactose,lactose-S-ph,LacMU ESI-MS(+Q)的检测结果 | 第62-64页 |
3. 岩藻糖基化lactose-S-ph的LC-MS鉴定结果 | 第64-66页 |
参考文献 | 第66-72页 |
致谢 | 第72-73页 |
攻读学位期间发表的论文 | 第73-74页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第74页 |