| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| ·PRRSV 的地位 | 第13页 |
| ·病原学 | 第13-15页 |
| ·流行病学 | 第15页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第15-16页 |
| ·PRRSV 的致病力 | 第16-18页 |
| ·PRRSV 免疫学的机制 | 第18-19页 |
| ·免疫机理 | 第18页 |
| ·免疫抑制 | 第18-19页 |
| ·PRRSV 的疫苗免疫保护力 | 第19-20页 |
| ·PRRSV 的预防 | 第20页 |
| ·PPRSV 的受体 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-51页 |
| ·材料 | 第21-26页 |
| ·样品来源 | 第21页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-24页 |
| ·生物试剂 | 第21-22页 |
| ·化学试剂 | 第22-24页 |
| ·仪器与设备 | 第24-25页 |
| ·工具酶 | 第25页 |
| ·培养基和溶液 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-51页 |
| ·表达波形蛋白 | 第26-38页 |
| ·目的基因的PCR 扩增及胶回收 | 第26-28页 |
| ·目的基因的连接、转化及鉴定 | 第28-31页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第31-35页 |
| ·测序鉴定正确的阳性表达质粒转化至E.coli BL21（DE | 第35页 |
| ·波形蛋白阳性质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·Westen-blot 分析 | 第36-38页 |
| ·阳性血清的制备及其在 PRRSV 感染 Marc-145 细胞中的阻断作用 | 第38-44页 |
| ·重组波形蛋白免疫小鼠 | 第38-42页 |
| ·检测三免后血清抗体效价 | 第42-43页 |
| ·IFA 检测抗波形蛋白阳性血清与Marc-145 细胞结合 | 第43页 |
| ·检测抗重组波形蛋白的阳性血清对PRRSV 的阻断作用 | 第43-44页 |
| ·I-ELISA 方法检测表达的重组波形蛋白与PRRSV 的GP5 蛋白及N 蛋白的关系 | 第44-45页 |
| ·包被重组表达波形蛋白 | 第44页 |
| ·封闭 | 第44-45页 |
| ·重组N 蛋白和GP5 蛋白 | 第45页 |
| ·一抗 | 第45页 |
| ·羊抗鼠二抗 | 第45页 |
| ·显色液 | 第45页 |
| ·终止液 | 第45页 |
| ·数据分析 | 第45页 |
| ·新型受体（R-5）的提取 | 第45-51页 |
| ·Marc145 细胞的传代 | 第45-46页 |
| ·Marc-145 细胞的收集 | 第46页 |
| ·免疫沉淀实验步骤 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE 试验步骤 | 第47-48页 |
| ·Western Blotting 试验步骤 | 第48-49页 |
| ·新型受体的制备 | 第49-51页 |
| ·I-ELISA 方法检测表达的重组波形蛋白与新型受体蛋白关系 | 第51页 |
| ·包被新型受体蛋白 | 第51页 |
| ·封闭 | 第51页 |
| ·重组表达的波形蛋白 | 第51页 |
| ·一抗 | 第51页 |
| ·羊抗鼠二抗 | 第51页 |
| ·显色液 | 第51页 |
| ·终止液 | 第51页 |
| ·通过EXCEL 软件分析并处理数据 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-67页 |
| ·波形蛋白表达结果 | 第51-59页 |
| ·目的基因的PCR 扩增结果 | 第51-52页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第52-54页 |
| ·序列测定与分析 | 第54-56页 |
| ·基因克隆结果 | 第56页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第56-58页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第58-59页 |
| ·重组波形蛋白的Westen-blot 结果 | 第59页 |
| ·阳性血清的制备及其在 PRRSV 感染 Marc-145 细胞中的阻 断作用 | 第59-63页 |
| ·用镊柱纯化重组波形蛋白结果 | 第59页 |
| ·考马斯亮蓝测定蛋白浓度的结果 | 第59-60页 |
| ·I-ELISA 方法测定鼠血清的抗体水平 | 第60页 |
| ·IFA 鉴定抗波形蛋白血清与Marc-145 细胞结合结果 | 第60-62页 |
| ·病毒阻断实验结果 | 第62-63页 |
| ·I-ELISA 方法检测表达的重组波形蛋白与PRRSV 的GP5 蛋白及N蛋白的结合结果 | 第63-64页 |
| ·与N 蛋白结合实验结果 | 第63页 |
| ·与GP5 蛋白结合实验结果 | 第63-64页 |
| ·新型受体（R-5）的提取结果 | 第64-66页 |
| ·SDS-PAGE 试验结果 | 第64-65页 |
| ·Western Blotting 试验结果 | 第65-66页 |
| ·测定提纯的新型受体蛋白的浓度 | 第66页 |
| ·I-ELISA 方法检测表达的重组波形蛋白与新型受体结合结果 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-72页 |
| ·表达波形蛋白 | 第67-69页 |
| ·抗波形蛋白血清的制备及其阻断作用 | 第69页 |
| ·波形蛋白与PRRSV N 蛋白及GP5 蛋白的关系 | 第69-70页 |
| ·新型受体提取 | 第70页 |
| ·波形蛋白与新型受体蛋白结合 | 第70-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| ·表达波形蛋白 | 第72页 |
| ·病毒阻断 | 第72页 |
| ·波形蛋白与PRRSV N 蛋白结合 | 第72页 |
| ·提取新型受体 | 第72页 |
| ·波形蛋白与新型受体蛋白结合 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 附录 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 个人简介 | 第87-88页 |
| 研究生期间发表论文 | 第88页 |
