| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 图和附表清单 | 第12-14页 |
| 英文縮写词汇表 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-19页 |
| 第一章 烟草烟雾冷凝物急性染毒对16HBE细胞Rap2B基因表达的影响 | 第19-35页 |
| 1 材料 | 第19-23页 |
| ·实验对象与受试物 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2 方法 | 第23-28页 |
| ·烟草烟雾冷凝物(CSC)的制备 | 第23页 |
| ·16HBE细胞的培养 | 第23页 |
| ·细胞增殖毒性试验 | 第23-24页 |
| ·细胞染毒处理 | 第24页 |
| ·细胞总RNA的提取及纯度、完整性鉴定 | 第24页 |
| ·RNA逆转录 | 第24-25页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第25-26页 |
| ·细胞总蛋白的提取、定量及检测 | 第26页 |
| ·蛋白的检测 | 第26-28页 |
| ·统计学分析 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-33页 |
| ·细胞形态学观察 | 第28-29页 |
| ·细胞增殖毒性试验结果分析 | 第29页 |
| ·RNA纯度及完整性检验 | 第29-30页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线结果 | 第30页 |
| ·荧光定量PCR检测结果 | 第30-32页 |
| ·蛋白定量结果 | 第32页 |
| ·Western Blot检测蛋白结果 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第二章 烟草烟雾冷凝物恶性转化16HBE细胞株的建立、鉴定及Rap2B基因的表达情况 | 第35-48页 |
| 1 材料 | 第35-37页 |
| ·实验对象与受试物 | 第35-36页 |
| ·实验仪器 | 第36页 |
| ·实验试剂 | 第36-37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-41页 |
| ·16HBE恶性转化细胞株的建立 | 第37页 |
| ·细胞染色体畸变实验 | 第37-38页 |
| ·软琼脂克隆形成实验 | 第38-39页 |
| ·裸鼠成瘤实验 | 第39页 |
| ·裸鼠肿瘤组织病理切片 | 第39-41页 |
| ·16HBE细胞恶性变过程中Rap2B基因表达情况的变化 | 第41页 |
| ·统计分析 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-46页 |
| ·16HBE细胞恶性变过程中形态学的变化 | 第41-42页 |
| ·染色体畸变分析 | 第42-43页 |
| ·软琼脂克隆形成实验 | 第43页 |
| ·裸鼠成瘤实验 | 第43-44页 |
| ·裸鼠肿瘤组织病理切片分析 | 第44页 |
| ·恶性变过程中Rap2B基因mRNA的表达水平情况 | 第44-45页 |
| ·恶性变过程中Rap2B蛋白的检测 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 烟草烟雾冷凝物对16HBE全基因组和Rap2B基因启动子甲基化情况初探 | 第48-63页 |
| 1 材料 | 第48-50页 |
| ·实验对象与受试物 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48-49页 |
| ·实验试剂 | 第49-50页 |
| ·主要试剂配制 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-56页 |
| ·细胞培养及处理 | 第50-51页 |
| ·亚硫酸氢盐修饰基因组DNA | 第51-52页 |
| ·全基因组甲基化的检测 | 第52-54页 |
| ·Rap2B基因启动子区甲基化检测 | 第54-56页 |
| ·统计分析 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-61页 |
| ·DNA的提取 | 第56-57页 |
| ·COBRA法检测全基因组甲基化结果 | 第57页 |
| ·BSP扩增结果 | 第57-58页 |
| ·PCR产物连接、转化结果 | 第58页 |
| ·Rap2B启动子区克隆测序结果 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 全文讨论 | 第63-66页 |
| 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
