| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-19页 |
| 1 禽呼肠孤病毒研究概述 | 第12-15页 |
| ·病原学 | 第12-13页 |
| ·培养特性 | 第13页 |
| ·流行病学与临床症状 | 第13-15页 |
| ·鸡呼肠孤病毒感染 | 第13-14页 |
| ·鸭呼肠孤病毒感染 | 第14-15页 |
| 2 致病机理 | 第15-19页 |
| ·肿瘤坏死因子TNF-α | 第15-19页 |
| ·TNF-α生物学活性及其在组织损伤中的作用 | 第15-17页 |
| ·禽呼肠孤病毒感染与TNF-α | 第17页 |
| ·呼肠孤病毒与细胞凋亡 | 第17-19页 |
| 本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-31页 |
| 1 材料 | 第20-22页 |
| ·供试毒株 | 第20页 |
| ·试验动物 | 第20页 |
| ·主要试剂耗材 | 第20页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第20-21页 |
| ·PBS(0.2M,PH=7.2,无钙镁)配制 | 第20-21页 |
| ·4%多聚甲醛 | 第21页 |
| ·细胞生长(营养)液 | 第21页 |
| ·细胞维持液 | 第21页 |
| ·50×TAE电泳缓冲液 | 第21页 |
| ·琼脂糖凝胶 | 第21页 |
| ·主要仪器、型号及生产厂家 | 第21-22页 |
| 2 方法 | 第22-31页 |
| ·毒株准备 | 第22-23页 |
| ·病毒增殖 | 第22页 |
| ·病毒的ELD50测定 | 第22-23页 |
| ·原代鸭胚成纤维细胞培养及传代 | 第23页 |
| ·病毒的接种和增殖 | 第23-24页 |
| ·病毒纯化及负染色观察 | 第24页 |
| ·病毒致鸭胚成纤维细胞的病变 | 第24-25页 |
| ·病毒致鸭胚成纤维细胞的超微病变 | 第25页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测细胞、细胞培养液以及两者混合物中病毒含量 | 第25-27页 |
| ·ELISA方法检测细胞培养液中TNF-α含量 | 第27页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测TNF-αmRNA表达水平 | 第27-30页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测TNF-αmRNA方法的建立 | 第27-30页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·细胞基因组总RNA提取 | 第27-29页 |
| ·PCR扩增检测β-actin、TNF-α基因cDNA | 第29页 |
| ·实时荧光定量PT-PCR扩增β-actin、TNF-α基因 | 第29-30页 |
| ·样品检测 | 第30页 |
| ·数据统计与处理 | 第30-31页 |
| 试验结果 | 第31-50页 |
| 1 鸭源禽呼肠孤病毒HP0931 8株的LD50测定 | 第31-32页 |
| 2 病毒纯化负染色观察 | 第32页 |
| 3 病毒致鸭胚成纤维细胞的病理变化观察 | 第32-39页 |
| ·倒置显微镜下观察细胞形态 | 第32-34页 |
| ·光镜下观察细胞病变 | 第34-35页 |
| ·鸭源禽呼肠孤病毒感染后超微组织病理学变化 | 第35-39页 |
| 4 实时荧光定量RT-PCR检测病毒细胞、细胞上清以及两者的混合物中病毒含量变化 | 第39-43页 |
| ·RT-PCR检测细胞、细胞上清以及两者的混合物中的病毒核酸RNA结果 | 第39-41页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测病毒含量结果 | 第41-43页 |
| 5 TNF-α的含量变化 | 第43-50页 |
| ·ELISA方法检测接毒组与对照组细胞上清中TNF-α含量变化 | 第43-45页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR扩增TNF-α基因 | 第45-50页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR扩增TNF-α基因方法的建立 | 第45-48页 |
| ·细胞总RNA的提取结果 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR检测β-actin基因与TNF-α基因结果 | 第46页 |
| ·实时荧光定量PCR扩增曲线 | 第46-47页 |
| ·熔解曲线分析 | 第47-48页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR方法扩增目的基因结果 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-53页 |
| 1 3株鸭源呼肠孤病毒的形态特点 | 第50页 |
| 2 3株鸭源呼肠孤病毒培养特性 | 第50-51页 |
| ·3株鸭源呼肠孤病毒致鸭胚病变特点 | 第50页 |
| ·3株鸭源呼肠孤病毒致细胞病变特点 | 第50-51页 |
| ·3株病毒在鸭胚成纤维细胞中增殖特点 | 第51页 |
| 3 3 株DRV病毒感染DEF后TNF-α含量变化 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录 | 第61页 |
