| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1 刺糖多孢菌所产多杀菌素研究进展 | 第11-16页 |
| ·结构特点和理化性质 | 第11-12页 |
| ·多杀菌素的生物合成 | 第12-15页 |
| ·杀虫活性与作用机制 | 第15页 |
| ·提高多杀菌素产量的策略 | 第15-16页 |
| 2 红霉素及其生物合成 | 第16-19页 |
| 3 原生质体融合 | 第19-20页 |
| 4 actⅡ-ORF4 /PactⅠ激活-启动元件研究 | 第20-21页 |
| 5 立题依据和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-34页 |
| 1 材料 | 第23-26页 |
| ·供试菌株 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·抗生素及其使用浓度 | 第24页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第24页 |
| ·PCR引物及产物测序 | 第24页 |
| ·常用溶液和缓冲液的配置 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2 研究方法 | 第26-34页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第26页 |
| ·刺糖多孢菌基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·小量提取大肠杆菌质粒DNA | 第27页 |
| ·PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·DNA的连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第29页 |
| ·快速筛选转化子 | 第29页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·红色糖多孢菌产红霉素阻断表达载体pOJ260D的构建 | 第29-30页 |
| ·启动子替换载体pLSB2-tspnA和pLSB2-spnA的构建 | 第30页 |
| ·启动子替换载体pLSB2-tspnA和pLSB2-spnA的工作原理 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌与红色糖多孢菌之间的属间接合转移 | 第31-32页 |
| ·原生质体融合及融合菌株的筛选 | 第32页 |
| ·发酵培养 | 第32页 |
| ·多杀菌素和红霉素高效液相色谱(HPLC)检测分析 | 第32-33页 |
| ·质谱分析融合菌素发酵所产多杀菌素组分 | 第33页 |
| ·糖多孢菌属菌株形态观察 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-45页 |
| 1 红色糖多孢菌产红霉素阻断表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2. 载体pOJ260D在大肠杆菌与红色糖多孢菌属间接合转移及在染色体上的整合 | 第35-36页 |
| 3. 红色糖多孢菌D特征分析 | 第36-38页 |
| 4. 原生质体融合及融合菌株的筛选 | 第38-40页 |
| 5. 质谱分析融合菌株所产多杀菌素 | 第40-41页 |
| 6. 融合菌株的再次筛选 | 第41-42页 |
| 7. 融合菌株的遗传稳定性 | 第42页 |
| 8. spnA基因和spnA基因起始模块的一部分(tspnA)的PCR扩增 | 第42-43页 |
| 9. 启动子替换载体pLSB2-tspnA的构建 | 第43-45页 |
| 讨论 | 第45-48页 |
| 小结和今后的研究设想 | 第48-50页 |
| 1. 小结 | 第48页 |
| 2. 今后工作设想 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第57-58页 |
| 本论文受资助的基金项目 | 第58-59页 |
