| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-21页 |
| 1 跨膜蛋白结构研究方法的现状 | 第13-17页 |
| ·跨膜蛋白概述 | 第13页 |
| ·跨膜蛋白结构的研究方法 | 第13-16页 |
| ·融合标签技术在跨膜蛋白结构研究中的应用 | 第13-14页 |
| ·结晶法在跨膜蛋白结构研究中的应用 | 第14-15页 |
| ·生物信息学方法预测跨膜蛋白拓扑结构 | 第15页 |
| ·核磁共振(NMR)方法用于蛋白质三维结构的研究 | 第15-16页 |
| ·低温电子显微技术在膜蛋白结构研究中的应用 | 第16页 |
| ·讨论 | 第16-17页 |
| 2 SNAT1的功能研究进展 | 第17-21页 |
| ·SNAT1具有多种生理功能 | 第17-19页 |
| ·SNAT1对胎儿生长的重要贡献 | 第17-18页 |
| ·SNAT1对心肌细胞中谷胱甘肽合成的影响 | 第18页 |
| ·SNAT1与自杀行为的关系 | 第18页 |
| ·SNAT1对大脑脉管系统中氨基酸含量的调节作用 | 第18-19页 |
| ·讨论 | 第19-21页 |
| 第二章 pBK-CMVΔ-SNAT1-HA的构建与表达 | 第21-36页 |
| 0 前言 | 第21-22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·载体，菌种和细胞株 | 第22页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·计算机软件及数据库 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·碱裂解法质粒大量抽提与纯化 | 第23-24页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第24-25页 |
| ·PCR产物的胶回收过程 | 第25页 |
| ·PCR产物与载体大片段的双酶切 | 第25-26页 |
| ·PCR产物与载体大片段的连接 | 第26页 |
| ·质粒转化 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第27页 |
| ·HEK293T细胞的培养与传代 | 第27页 |
| ·质粒转染 HEK293T细胞 | 第27-28页 |
| ·细胞总蛋白与膜蛋白的提取 | 第28页 |
| ·Western Blot分析蛋白质的表达 | 第28-31页 |
| 2 结果 | 第31-34页 |
| ·目的片段的PCR结果 | 第31-32页 |
| ·大小片段双酶切反应的结果 | 第32-33页 |
| ·pBK-CMVΔ-SNAT1-HA的大小 | 第33页 |
| ·SNAT1-HA融合蛋白的表达 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 SNAT1-HA-EGFP融合蛋白的构建 | 第36-48页 |
| 0 前言 | 第36-38页 |
| 1 材料与方法 | 第38-43页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·载体，菌种和细胞株 | 第38页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| ·计算机软件及数据库 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·引物的设计与PCR扩增 | 第39-41页 |
| ·质粒单酶切与大小片段的连接 | 第41页 |
| ·连接产物的转化及鉴定 | 第41-42页 |
| ·定点突变 | 第42页 |
| ·HEK293T细胞的转染 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白的提取与鉴定 | 第43页 |
| 2 结果 | 第43-47页 |
| ·EGFP 基因的扩增 | 第43-44页 |
| ·pBK-CMVΔ-SNAT1-HA-TGA-EGFP真核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·pBK-CMVΔ-SNAT1-HA-TGA-EGFP真核表达载体的菌液PCR鉴定 | 第45页 |
| ·pBK-CMV-Δ-SNAT1-HA-TGA-EGFP中的终止密码子TGA的突变 | 第45页 |
| ·融合蛋白 SNAT1-HA-EGFP 在 HEK293T细胞中的表达 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 大鼠SNAT1中二硫键数量和位置的探究 | 第48-64页 |
| 0 前言 | 第48-50页 |
| 1 材料与方法 | 第50-56页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·载体，菌种和细胞株 | 第50页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第50-51页 |
| ·主要仪器设备 | 第51页 |
| ·计算机软件及数据库 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-56页 |
| ·直接的mPEG5000-mal修饰 | 第51-52页 |
| ·碘乙酰胺（IA）处理后的mPEG5000-mal修饰 | 第52-53页 |
| ·Cys的定点突变 | 第53-54页 |
| ·对各种 Cys 突变型的mPEG5000-mal的修饰 | 第54页 |
| ·生物素标记提取膜蛋白 | 第54-55页 |
| ·NaOH法洗涤PVDF膜 | 第55-56页 |
| 3 实验结果 | 第56-59页 |
| ·直接的mPEG5000-mal修饰 | 第56页 |
| ·IA处理后的mPEG5000-mal修饰 | 第56-57页 |
| ·十个SNAT1单半胱氨酸突变型的表达情况 | 第57页 |
| ·十个SNAT1单半胱氨酸突变型的膜上定位情况 | 第57-59页 |
| ·SNAT1中二硫键位置的探索 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 研究小结 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
