| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-23页 |
| 1. 以血管重塑为基础的心脑血管疾病对人类健康危害严重 | 第10页 |
| 2. 血管重塑的发生是一个多因素多环节的复杂过程 | 第10-19页 |
| ·血管重塑的力学机制及炎性机制 | 第11-13页 |
| ·血管平滑肌的迁移、增殖是血管重塑启动阶段的重要细胞学基础 | 第13-15页 |
| ·基质金属蛋白酶表达及活性异常是导致血管重塑的重要分子机制 | 第15-19页 |
| 3. SIRT1的功能提示它可能有抵抗血管平滑肌迁移及缓解血管重塑的作用 | 第19-21页 |
| 4. SIRT1是否可以抑制血管平滑肌迁移是本研究的重点 | 第21-23页 |
| 实验材料 | 第23-26页 |
| 1. 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2. 实验用小鼠及饲料 | 第23页 |
| 3. 限制性内切酶和其他修饰酶 | 第23-24页 |
| 4. 细胞系 | 第24页 |
| 5. 其他主要试剂 | 第24页 |
| 6. 实验用抗体 | 第24-25页 |
| 7. 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 实验方法 | 第26-47页 |
| 1. 细菌操作与质粒的转化 | 第26-27页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5 α制备 | 第26页 |
| ·质粒的转化和扩增 | 第26页 |
| ·质粒的提取和纯化 | 第26-27页 |
| 2. MMP-9启动子点突变克隆构建 | 第27-28页 |
| 3. 细胞培养 | 第28-29页 |
| ·细胞的生长条件 | 第28页 |
| ·细胞的传代 | 第28-29页 |
| ·细胞的复苏及冻存 | 第29页 |
| 4. 动脉血管平滑肌细胞的培养 | 第29-30页 |
| ·大鼠主动脉血管平滑肌细胞的培养 | 第29-30页 |
| ·TNF-α处理大鼠主动脉血管平滑肌细胞 | 第30页 |
| 5. 血管平滑肌细胞腺病毒感染 | 第30-31页 |
| 6. 双荧光素酶报告系统测定启动子活性 | 第31页 |
| 7. 半定量RT-PCR | 第31-32页 |
| ·RNA提取 | 第31-32页 |
| ·逆转录PCR(RT-PCR) | 第32页 |
| 8. WESTERN BLOTTING | 第32-35页 |
| ·细胞及组织总蛋白提取 | 第32-33页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第33页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第33-34页 |
| ·抗原抗体反应 | 第34页 |
| ·辣根过氧化物酶化学发光法检测蛋白(ECL反应) | 第34-35页 |
| ·溶液配制 | 第35页 |
| 9. 蛋白质免疫共沉淀 | 第35-36页 |
| ·细胞裂解 | 第35页 |
| ·免疫沉淀 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE | 第36页 |
| 10. 染色质免疫共沉淀(CHIP) | 第36-39页 |
| ·细胞固定 | 第36页 |
| ·细胞核的提取 | 第36页 |
| ·细胞核的裂解与超声处理 | 第36-37页 |
| ·超声结果分析 | 第37页 |
| ·免疫沉淀 | 第37页 |
| ·DNA的分离及纯化 | 第37-38页 |
| ·PCR反应 | 第38页 |
| ·溶液配制 | 第38-39页 |
| 11. 免疫荧光 | 第39-40页 |
| 12. 平滑肌迁移实验 | 第40-41页 |
| ·平滑肌平面迁移实验 | 第40页 |
| ·平滑肌跨膜迁移实验 | 第40-41页 |
| 13. MMP酶谱法检测实验 | 第41-42页 |
| 14. 转基因鼠传代 | 第42页 |
| 15. PCR鉴定转基因鼠 | 第42页 |
| 16. 大鼠颈总动脉球囊损伤模型 | 第42-43页 |
| 17. 小鼠颈总动脉结扎损伤模型 | 第43页 |
| 18. 大小鼠组织器官的采集和保存 | 第43-44页 |
| 19. 组织切片、HE染色和免疫组化 | 第44-46页 |
| ·组织切片 | 第44页 |
| ·HE染色 | 第44-45页 |
| ·免疫组化 | 第45-46页 |
| 20. 统计学方法 | 第46-47页 |
| 实验结果 | 第47-64页 |
| 1. 球囊损伤的颈总动脉和TNF-A处理的血管平滑肌中SIRT1的表达增加 | 第47-49页 |
| 2. SIRT1抑制原代血管平滑肌细胞的迁移 | 第49-52页 |
| 3. SIRT1抑制血管平滑肌细胞中金属蛋白酶MMP-9的表达和活性 | 第52-55页 |
| 4. AP-1介导了SIRT1对MMP-9表达的抑制作用 | 第55-61页 |
| 5. 颈总动脉结扎模型显示动脉血管平滑肌特异的SIRT1转基因鼠MMP-9的表达和活性降低 | 第61-64页 |
| 讨论 | 第64-73页 |
| 1. GIRT1抵抗血管重塑性疾病的线索:抵抗炎症与应激反应 | 第64-66页 |
| 2. TNF-A诱导血管平滑肌中SIRT1的表达体现了机体的内源性保护效应 | 第66页 |
| 3. 选择血管平滑肌细胞作为研究对象的优势 | 第66-67页 |
| 4. GIRT1抑制血管平滑肌的迁移 | 第67-70页 |
| ·Sirt1抑制血管平滑肌MMP-9的表达是其抑制血管平滑肌迁移的重要原因 | 第68-69页 |
| ·Sirt1抑制血管平滑肌迁移的其他可能因素 | 第69-70页 |
| 5. SIRT1通过抑制AP-1转录活性来抑制MMP-9的表达 | 第70-71页 |
| 6. SIRT1抑制血管平滑肌细胞迁移的机制总结 | 第71页 |
| 7. 工作的不足和展望 | 第71-73页 |
| 小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 文献综述 | 第80-96页 |
| 英文名词及缩写 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 个人简历 | 第99-101页 |
