| 英文缩略语表 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 中文摘要 | 第14-16页 |
| 技术路线 | 第16-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一部分:OY-TES-1融合蛋白的原核表达、纯化与鉴定 | 第19-36页 |
| 材料与方法 | 第19-28页 |
| 1 实验材料与设备 | 第19-20页 |
| 2 实验方法 | 第20-28页 |
| ·引物的设计 | 第20-22页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第22页 |
| ·PCR产物纯化 | 第22-23页 |
| ·PCR产物酶切处理 | 第23页 |
| ·质粒转化大肠杆菌 | 第23-24页 |
| ·质粒的扩增与提取 | 第24页 |
| ·质粒酶切处理 | 第24-25页 |
| ·目的基因片段与质粒的连接 | 第25页 |
| ·重组质粒的转化与筛选 | 第25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的保存 | 第26页 |
| ·菌种的保存 | 第26页 |
| ·融合蛋白的制备 | 第26-27页 |
| ·融合蛋白的分离纯化 | 第27页 |
| ·融合蛋白的鉴定 | 第27-28页 |
| 结果 | 第28-36页 |
| 1 PCR扩增目的基因片段 | 第28页 |
| 2 质粒的提取纯化 | 第28-29页 |
| 3 重组质粒的鉴定 | 第29-34页 |
| ·PCR扩增 | 第29页 |
| ·内切酶酶切 | 第29-30页 |
| ·基因测序 | 第30-34页 |
| 4 融合蛋白的制备 | 第34页 |
| 5 融合蛋白的分离纯化 | 第34-35页 |
| 6 目的蛋白的鉴定 | 第35-36页 |
| 第二部分:OY-TES-1的生物信息学分析 | 第36-49页 |
| 材料与方法 | 第36-38页 |
| 1 实验材料与设备 | 第36页 |
| 2 实验方法 | 第36-38页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第36-37页 |
| ·分析步骤 | 第37-38页 |
| 结果 | 第38-49页 |
| 1 核酸信息 | 第38页 |
| 2 蛋白信息 | 第38-49页 |
| ·目的蛋白的理化性质 | 第38-40页 |
| ·蛋白同源性 | 第40-42页 |
| ·蛋白二级结构 | 第42-43页 |
| ·蛋白结构域与功能域 | 第43-47页 |
| ·SEREX分析 | 第47页 |
| ·表位的预测 | 第47-49页 |
| 第三部分:OY-TES-1多克隆抗体的制备 | 第49-57页 |
| 材料与方法 | 第49-54页 |
| 1 实验材料与设备 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-54页 |
| ·抗原的来源及制备 | 第49-50页 |
| ·免疫动物 | 第50页 |
| ·抗血清的收集与纯化 | 第50-51页 |
| ·多克隆抗体的鉴定 | 第51-54页 |
| 结果 | 第54-57页 |
| 1 多克隆抗体的纯化 | 第54-55页 |
| 2 多克隆抗体的效价 | 第55页 |
| 3 多克隆抗体的特异性 | 第55-57页 |
| 第四部分:OY-TES-1基因表达的检测 | 第57-84页 |
| 材料与方法 | 第57-70页 |
| 1 实验材料与设备 | 第57-61页 |
| 2 实验方法 | 第61-70页 |
| ·定量PCR | 第61-68页 |
| ·总RNA的提取 | 第61-62页 |
| ·总RNA的检测 | 第62-63页 |
| ·cDNA合成 | 第63页 |
| ·引物特异性的检测 | 第63-64页 |
| ·cDNA质量检测 | 第64页 |
| ·管家基因的重组 | 第64页 |
| ·双标准品的制备 | 第64-65页 |
| ·定量PCR反应条件的优化 | 第65-68页 |
| ·目的基因及管家基因mRNA量的检测 | 第68页 |
| ·组织切片染色 | 第68-69页 |
| ·SP法 | 第68-69页 |
| ·HE染色 | 第69页 |
| ·统计学处理 | 第69-70页 |
| 结果 | 第70-84页 |
| 1 OY-TES-1 mRNA的定量PCR检测 | 第70-76页 |
| ·RNA质量检测 | 第70页 |
| ·PCR引物特异性检测 | 第70-71页 |
| ·cDNA质量的检测 | 第71页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第71-72页 |
| ·标准曲线的制作 | 第72页 |
| ·定量PCR的重复性检测 | 第72-73页 |
| ·组织中OY-TES-1mRNA量的检测 | 第73-76页 |
| 2 OY-TES-1蛋白的表达检测 | 第76-84页 |
| ·OY-TES-1蛋白在正常组织中的表达 | 第76页 |
| ·OY-TES-1蛋白在非肿瘤病变组织中的表达 | 第76页 |
| ·OY-TES-1蛋白在肿瘤组织中的表达 | 第76-84页 |
| 第五部分:OY-TES-1抗体血清学检测 | 第84-97页 |
| 材料与方法 | 第84-88页 |
| 1 实验材料与设备 | 第84-85页 |
| 2 实验方法 | 第85-88页 |
| ·融合蛋白的定量 | 第85页 |
| ·ELISA的技术流程 | 第85页 |
| ·实验参数的设定 | 第85-86页 |
| ·ELISA实验具体步骤 | 第86-87页 |
| ·统计学处理 | 第87-88页 |
| 结果 | 第88-97页 |
| 1 阳性血清的确定 | 第88页 |
| 2 ELISA实验条件的优化 | 第88-90页 |
| 3 血清抗体的检测 | 第90-92页 |
| 4 OY-TES-1抗体与肿瘤临床指标关系的分析 | 第92-94页 |
| 5 OY-TES-1抗体血清学检测在临床诊断的评价 | 第94-97页 |
| 全文讨论 | 第97-105页 |
| 1 目的蛋白的生物信息学分析 | 第97-98页 |
| 2 多克隆抗体的制备 | 第98-99页 |
| 3 目的基因的表达及意义 | 第99-102页 |
| ·在正常组织中的表达 | 第99-101页 |
| ·在肿瘤组织中的表达 | 第101-102页 |
| ·在不育症病人睾丸组织中的表达 | 第102页 |
| 4 血清学检测的意义 | 第102-104页 |
| 5 问题与展望 | 第104-105页 |
| 全文小结 | 第105-106页 |
| 创新点 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-110页 |
| 附页 | 第110-118页 |
| 主要试剂的配制 | 第110-117页 |
| 普通PCR与定量PCR引物在OY-TES-1mRNA序列上的定位 | 第117-118页 |
| 综述 精子蛋白32及其前体OY-TES-1研究进展 | 第118-124页 |
| 1 sp32生物学特性 | 第118页 |
| 2 sp32及前体的基因表达 | 第118-120页 |
| 3.生物功能 | 第120-121页 |
| 4.结语 | 第121-124页 |
| 读博期间发表的文章 | 第124页 |
