| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 引言 | 第7-8页 |
| 第二章 材料与方法 | 第8-21页 |
| ·实验材料 | 第8-10页 |
| ·细胞株、质粒和大鼠来源 | 第8页 |
| ·主要试剂和产地 | 第8-9页 |
| ·仪器设备和产地 | 第9-10页 |
| ·实验方法和步骤 | 第10-21页 |
| ·RT-PCR 获得目的基因pim-3 cDNA 片段 | 第10-12页 |
| ·从♂ Wistar 大鼠骨骼肌和心肌组织中提取RNA | 第10页 |
| ·逆转录即cDNA 的合成 | 第10-11页 |
| ·PCR 扩增 | 第11页 |
| ·纯化回收cDNA | 第11-12页 |
| ·重组质粒pEGFP-N_2/pim-3 的构建与鉴定 | 第12-16页 |
| ·LB 液体培养基的配制 | 第12页 |
| ·LB 固体培养基的制备 | 第12页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第12-13页 |
| ·质粒pEGFP-N_2的提取 | 第13-14页 |
| ·cDNA 和质粒的双酶切及纯化回收 | 第14-15页 |
| ·酶切产物的连接和转化 | 第15-16页 |
| ·阳性克隆的挑取与鉴定 | 第16页 |
| ·重组质粒pEGFP-N_2/pim-3 转染真核细胞 | 第16-20页 |
| ·细胞培养常用器具及试剂的消毒 | 第16页 |
| ·细胞培养常用液体的配制 | 第16-17页 |
| ·SMMC-7721 细胞的常规培养 | 第17-19页 |
| ·瞬时转染 | 第19页 |
| ·利用荧光倒置显微镜观察转染细胞 | 第19-20页 |
| ·利用流式细胞仪检测细胞凋亡率 | 第20页 |
| ·MTT 法（即四唑盐比色法）分析 | 第20页 |
| ·统计学处理 | 第20-21页 |
| 第三章 结果 | 第21-29页 |
| ·从♂ Wistar 大鼠骨骼肌和心肌组织中提取的RNA | 第21页 |
| ·大鼠原癌基因pim-3 的扩增 | 第21-22页 |
| ·重组筛选及酶切鉴定结果 | 第22-24页 |
| ·LB 固体培养基菌落生长情况及阳性克隆的酶切鉴定 | 第22-24页 |
| ·目的基因片段的测序结果 | 第24页 |
| ·pim-3 在真核细胞内的表达情况 | 第24-26页 |
| ·流式细胞术检查结果 | 第26-27页 |
| ·质粒转染后MTT 比色试验检测结果 | 第27-29页 |
| 第四章 讨论 | 第29-31页 |
| 第五章 结论 | 第31-32页 |
| 致谢 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-36页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第36页 |
