| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 材料与方法 | 第10-23页 |
| 1 材料 | 第10-13页 |
| ·植物材料 | 第10页 |
| ·菌株和质粒 | 第10页 |
| ·酶和生化试剂 | 第10页 |
| ·引物 | 第10-11页 |
| ·主要溶液的化学成分 | 第11-13页 |
| ·主要仪器 | 第13页 |
| 2 方法 | 第13-23页 |
| ·中间偃麦草组织再生培养体系的建立 | 第13-14页 |
| ·基因枪法将pBIGFP和pBI-ipt导入中间偃麦草 | 第14-15页 |
| ·激光微束穿刺转化法 | 第15-16页 |
| ·异戊烯基转移酶基因(ipt)的克隆 | 第16-17页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第17-19页 |
| ·质粒pBI121-ipt的大量提取(碱裂解法) | 第19-20页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第20-21页 |
| ·转基因植株检测 | 第21-23页 |
| 结果与分析 | 第23-37页 |
| 1 中间偃麦草再生体系的建立 | 第23-26页 |
| ·愈伤组织的诱导及继代 | 第23-25页 |
| ·芽分化 | 第25-26页 |
| 2 基因枪法转化与激光法转化 | 第26-27页 |
| ·质壁分离检测 | 第26-27页 |
| ·gfp基因的瞬时表达检测 | 第27页 |
| 3 ipt基因的克隆 | 第27-31页 |
| ·农杆菌c58 Ti质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·ipt基因PCR扩增 | 第28页 |
| ·重组质粒pGEM-ipt的筛选 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pGEM-ipt鉴定 | 第29-31页 |
| 4 植物表达载体的构建 | 第31-33页 |
| ·构建思路 | 第31-32页 |
| ·表达载体PCR鉴定 | 第32页 |
| ·表达载体酶切鉴定 | 第32页 |
| ·表达载体测序鉴定 | 第32-33页 |
| 5 转基因植株的检测 | 第33-37页 |
| ·中间偃麦草基因组是否含抗卡那霉素基因检测 | 第33页 |
| ·抗性筛选 | 第33-35页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第35页 |
| ·Southern杂交检测 | 第35-37页 |
| 讨论 | 第37-39页 |
| 1 中间偃麦草再生体系建立 | 第37页 |
| 2 激光微束穿刺法和基因枪法的优缺点 | 第37-38页 |
| 3 关于异戊烯基转移酶基因(ipt)的一些思考 | 第38-39页 |
| 4 地高辛标记的优缺点 | 第39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 文献综述 | 第41-58页 |
| 致谢 | 第58页 |