利用噬菌体展示随机环七肽库筛选HPA小肽抑制剂
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 第一章 靶蛋白HPA小亚基的表达和纯化 | 第18-37页 |
| 1.材料与方法 | 第18-29页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·主要培养基和溶液的配制 | 第19-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·设计合成引物 | 第21-22页 |
| ·PCR扩增目的条带 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的构建 | 第23-26页 |
| ·HPA小亚基蛋白的表达 | 第26-28页 |
| ·蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| ·Folin-酚试剂法测定蛋白浓度 | 第29页 |
| 2.结果与讨论 | 第29-37页 |
| ·HPA小亚基的PCR结果 | 第29-30页 |
| ·HPA小亚基蛋白的诱导表达、分离纯化 | 第30-34页 |
| ·HPA小亚基蛋白的透析复性 | 第34-35页 |
| ·结论 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 噬菌体展示随机肽库的筛选及初步鉴定 | 第37-54页 |
| 1.材料与方法 | 第37-43页 |
| ·菌株、蛋白和抗体库 | 第37-38页 |
| ·酶和主要生化试剂 | 第38页 |
| ·主要培养基和溶液的配制 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·靶抗原蛋白的处理 | 第39页 |
| ·噬菌体展示随机环七肽库的筛选 | 第39-41页 |
| ·ELISA筛选噬菌体阳性克隆 | 第41-43页 |
| ·阳性噬菌体克隆的DNA序列测定及同源性分析 | 第43页 |
| 2.结果与讨论 | 第43-54页 |
| ·噬菌体展示随机环七肽库筛选回收率 | 第43-45页 |
| ·噬菌体单克隆样品的亲和力鉴定 | 第45-48页 |
| ·ssDNA及短肽氨基酸序列分析 | 第48-52页 |
| ·结论 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 小分子多肽的合成与活性测定 | 第54-67页 |
| 1.材料与方法 | 第55-58页 |
| ·细胞株 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要细胞培养基及溶液配制 | 第55-56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| 2.结果与讨论 | 第58-67页 |
| ·化学合成环七肽P1和P8的鉴定图谱 | 第58-63页 |
| ·肿瘤细胞体外侵袭模型的建立 | 第63-64页 |
| ·样品对HepG-2细胞体外侵袭行为的影响 | 第64-65页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| 讨论 | 第67-71页 |
| 一、HPA小亚基蛋白的高浓度透析复性 | 第67页 |
| 二、噬菌体展示随机多肽库技术及本课题的意义 | 第67-68页 |
| 三、噬菌体展示随机环七肽库筛选实验方法及结果分析 | 第68-69页 |
| 四、体外重组基底膜试验检测筛选小肽活性 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77页 |
