| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 3-酮酯酰-CoA还原酶(BnKCR2)基因的克隆,序列分析和中间载体构建 | 第14-48页 |
| 1 材料 | 第14-19页 |
| ·实验材料 | 第14页 |
| ·菌株和载体 | 第14-16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·试剂配方 | 第16-19页 |
| 2 方法 | 第19-27页 |
| ·引物设计 | 第19页 |
| ·甘蓝型油菜总RNA提取 | 第19-20页 |
| ·总RNA的反转录 | 第20-21页 |
| ·PCR反应扩增BnKCR2片段 | 第21-22页 |
| ·PCR产物的回收 | 第22页 |
| ·利用pMD18-T载体克隆BnKCR2片段 | 第22-24页 |
| ·中间载体pBluescript-SK(pSK)的建立 | 第24-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-47页 |
| ·甘蓝型油菜总RNA的提取 | 第27页 |
| ·甘蓝型油菜3-酮酯酰-CoA还原酶(BnKCR2)基因的扩增 | 第27-28页 |
| ·pMD18-BnKCR2重组质粒鉴定 | 第28-29页 |
| ·甘蓝型油菜BnKCR2基因全长cDNA的核酸序列分析 | 第29-30页 |
| ·BnKCR2基因序列同源性分析 | 第30-34页 |
| ·甘蓝型油菜BnKCR2基因推导蛋白质序列 | 第34页 |
| ·BnKCR2推导蛋白质序列结构分析 | 第34-45页 |
| ·中间载体pSK-BnKCR2的构建 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 第二部分 甘蓝型油菜3-酮酯酰-CoA还原酶BnKCR2基因的原核表达与初步分离纯化 | 第48-57页 |
| 1 材料 | 第48-50页 |
| ·菌株和载体 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48-49页 |
| ·试剂配方 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-54页 |
| ·GTK-BnKCR2表达载体的构建 | 第50-52页 |
| ·GST-BnKCR2融合蛋白的诱导表达 | 第52-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-56页 |
| ·克隆载体和克隆片段的制备 | 第54页 |
| ·重组质粒的检测 | 第54-55页 |
| ·GTK-BnKCR2融合蛋白检测 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 第三部分 甘蓝型油菜3-酮酯酰-CoA还原酶(BnKCR2)基因导入油菜中的研究 | 第57-68页 |
| 1 材料 | 第57-59页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·菌株和载体 | 第57-58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| ·试剂配方 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-62页 |
| ·酶切载体pMD18-BnKCR2、pSK-BnKCR2以及pBI121载体 | 第59-60页 |
| ·连接和转化 | 第60页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第60页 |
| ·转化农杆菌EHA105 | 第60-61页 |
| ·通过农杆菌EHA105介导将BnKCR2基因导入油菜 | 第61-62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-67页 |
| ·pBI121载体双酶切 | 第62-63页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第63页 |
| ·双酶切分析真核表达载体 | 第63-65页 |
| ·阳性农杆菌转化子的鉴定 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 文献综述 | 第68-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 在读硕士期间发表论文 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
