细菌对磺胺类药物耐药基因三重PCR检测试剂盒研制与应用
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| ·耐药性的产生及其检测方法研究进展 | 第12-14页 |
| ·细菌耐药现状概述 | 第12页 |
| ·耐药性检测方法研究进展 | 第12-14页 |
| ·PCR耐药性检测试剂盒的研究 | 第14-15页 |
| ·细菌对磺胺类药物的耐药情况 | 第15-18页 |
| ·磺胺类药物的性质及其作用机理 | 第15-16页 |
| ·细菌对磺胺类药的耐药机制 | 第16-17页 |
| ·细菌对磺胺类药的耐药现状 | 第17-18页 |
| ·磺胺类药物耐药基因及扩增目的基因的选择 | 第18页 |
| ·本研究的前期工作基础 | 第18-19页 |
| ·存在的问题及本研究的创新点 | 第19页 |
| ·本研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 2. 试验材料 | 第20-21页 |
| ·试验菌株 | 第20页 |
| ·试验试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| 3. 试验方法 | 第21-28页 |
| ·样品的采集 | 第21页 |
| ·细菌分离、纯化及鉴定 | 第21页 |
| ·三重PCR反应引物设计 | 第21-22页 |
| ·试剂盒阳性对照的制备 | 第22-23页 |
| ·单基因PCR扩增模板制备 | 第22页 |
| ·单基因PCR扩增及阳性菌株的筛选 | 第22页 |
| ·PCR阳性扩增产物纯化、回收 | 第22-23页 |
| ·核酸序列测定及同源性分析 | 第23页 |
| ·三重PCR基本模式的建立 | 第23页 |
| ·三重PCR反应体系的优化 | 第23-24页 |
| ·PCR反应各组分浓度的优化 | 第23页 |
| ·PCR反应参数的优化 | 第23-24页 |
| ·模板制备方法的筛选及优化 | 第24-25页 |
| ·模板制备方法的筛选 | 第24-25页 |
| ·模板制备选定方法的优化 | 第25页 |
| ·试剂盒操作方法的建立 | 第25页 |
| ·试剂盒敏感性试验 | 第25页 |
| ·试剂盒特异性试验 | 第25-26页 |
| ·试剂盒重复性试验 | 第26页 |
| ·试剂盒的保存期试验 | 第26页 |
| ·试剂盒的外包装和内容 | 第26页 |
| ·试剂盒的应用 | 第26-27页 |
| ·试剂盒检测与药敏试验比较 | 第26-27页 |
| ·对我国24个省的样品进行耐药性检测 | 第27页 |
| ·试剂盒操作规程(草案)拟定 | 第27-28页 |
| 4. 试验结果与分析 | 第28-44页 |
| ·样品采集及细菌的分离纯化鉴定结果 | 第28页 |
| ·阳性对照的筛选及序列测定结果 | 第28-31页 |
| ·阳性菌株筛选结果 | 第28页 |
| ·阳性扩增序列测定结果及同源性分析 | 第28-31页 |
| ·三重PCR反应体系的优化结果 | 第31-34页 |
| ·PCR反应各组分浓度的优化结果 | 第31-33页 |
| ·PCR反应参数的优化结果 | 第33-34页 |
| ·样品模板制备方法的筛选和优化 | 第34-35页 |
| ·模板制备方法的筛选结果 | 第34页 |
| ·模板制备选定方法的优化结果 | 第34-35页 |
| ·试剂盒样品制备及三重PCR扩增方法的确立 | 第35-36页 |
| ·待检样品制备 | 第35页 |
| ·PCR扩增,各组分浓度和反应参数如下 | 第35-36页 |
| ·PCR阴性对照及阳性对照 | 第36页 |
| ·PCR检测结果判断 | 第36页 |
| ·试剂盒敏感性试验结果 | 第36-37页 |
| ·试剂盒特异性试验结果 | 第37页 |
| ·试剂盒重复性试验结果 | 第37-38页 |
| ·批内重复性 | 第37-38页 |
| ·批间重复性 | 第38页 |
| ·试剂盒保存期试验结果 | 第38-39页 |
| ·试剂盒的外包装和内容 | 第39页 |
| ·试剂盒的应用结果 | 第39-44页 |
| ·试剂盒与常规药敏试验比较 | 第39-41页 |
| ·对全国24个省的样品进行耐药性检测结果 | 第41-44页 |
| ·试剂盒操作规程(草案)的拟定结果 | 第44页 |
| 5. 讨论 | 第44-50页 |
| ·磺胺类药物耐药基因三重PCR检测试剂盒的制备 | 第44-45页 |
| ·三重PCR检测试剂盒研制的必要性 | 第44页 |
| ·PCR扩增目的基因的选择 | 第44页 |
| ·三重PCR检测试剂盒的性能 | 第44-45页 |
| ·关于多重引物设计原则 | 第45页 |
| ·关于PCR反应模板制备方法的筛选与优化 | 第45-46页 |
| ·关于多重PCR反应方法建立和优化的影响因素 | 第46-47页 |
| ·关于试剂盒敏感性的影响因素 | 第47-48页 |
| ·关于试剂盒重复性影响因素 | 第48页 |
| ·关于试剂盒的保存期的影响因素 | 第48页 |
| ·关于试剂盒的应用 | 第48-50页 |
| 6. 结论 | 第50-51页 |
| 附录1 | 第51-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第61页 |
