| 缩略词表 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第一部分 哺乳动物溶酶体半胱氨酸蛋白酶与粥样动脉硬化等疾病的关系 | 第15-72页 |
| 1 综述 | 第15-37页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶 | 第15-17页 |
| ·蛋白酶 | 第15页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的分类 | 第15-17页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶 | 第17-26页 |
| ·概论 | 第17-18页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶作用的结构与机制 | 第18-21页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶原的活化 | 第21-22页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶活性调控 | 第22-23页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶生理功能 | 第23-26页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶和MHC Ⅱ类抗原递呈 | 第24页 |
| ·骨重建和Cat K的特异作用 | 第24-25页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶在肿瘤中 | 第25页 |
| ·凋亡和溶酶体半胱氨酸蛋白酶 | 第25-26页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶与粥样动脉硬化 | 第26-37页 |
| ·粥样动脉硬化与蛋白酶 | 第26-28页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶及其抑制剂Cystatin C的表达调控 | 第28-32页 |
| ·粥样动脉硬化中溶酶体半胱氨酸蛋白酶的过量表达和Cystatin C的缺乏 | 第28-29页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶与CystatinC在体外的表达与分泌 | 第29-30页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶在胞外的水解活性 | 第30-32页 |
| ·溶酶体半胱氨酸蛋白酶与粥样动脉硬化 | 第32-35页 |
| ·起始期 | 第32-33页 |
| ·发展期 | 第33-34页 |
| ·并发期 | 第34-35页 |
| ·结论 | 第35-37页 |
| 2 实验内容与研究意义 | 第37-40页 |
| ·研究背景与意义 | 第37-39页 |
| ·Cat L在人粥样动脉硬化、腹主动脉瘤和血管细胞中的功能研究 | 第37页 |
| ·Cat S在粥样动脉硬化和糖尿病病人中血清水平的研究 | 第37-38页 |
| ·小鼠Cat R基因结构、特性与启动子功能的初步研究 | 第38-39页 |
| ·实验流程 | 第39-40页 |
| 3 材料与方法 | 第40-49页 |
| ·病人的选择 | 第40-41页 |
| ·心血管病人与正常人的选择 | 第40页 |
| ·糖尿病病人的选择 | 第40-41页 |
| ·样品的收集和病人信息记录 | 第41页 |
| ·人Cat S的ELISA分析 | 第41页 |
| ·人Cat L的ELISA分析 | 第41-42页 |
| ·人Cystatin C的ELISA分析 | 第42页 |
| ·组织切片免疫组化基本方法 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第42页 |
| ·Western blot | 第42-43页 |
| ·细胞培养 | 第43页 |
| ·总RNA的抽提和mRNA纯化 | 第43-44页 |
| ·总RNA抽提 | 第43-44页 |
| ·mRNA纯化 | 第44页 |
| ·反转录及Real-time PCR | 第44-45页 |
| ·PCR及引物设计 | 第45页 |
| ·DNA电泳 | 第45页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶活性位标记分析 | 第45页 |
| ·弹性蛋白和胶原蛋白水解活性分析 | 第45页 |
| ·统计分析 | 第45-46页 |
| ·随机引物法标记杂交探针 | 第46页 |
| ·Northern杂交 | 第46-47页 |
| ·链末端终止法测序 | 第47-48页 |
| ·引物延伸分析 | 第48-49页 |
| 4.结果与讨论 | 第49-65页 |
| ·Cat L在人粥样动脉硬化、腹主动脉瘤和血管细胞中的表达与调控 | 第49-56页 |
| ·结果 | 第49-53页 |
| ·在AAAs和粉瘤中升高的Cat L表达 | 第49页 |
| ·Cat L与SMC、EC和MΦ共定位 | 第49-50页 |
| ·促炎性细胞因子和生长因子调控了体外Cat L的表达或活性 | 第50-52页 |
| ·粥样动脉硬化病人中升高的血清Cat L水平 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·在粥样动脉硬化和糖尿病病人中升高的血清Cat S水平 | 第56-63页 |
| ·结果 | 第56-60页 |
| ·粥样动脉硬化狭窄病人的Cat S和Cystatin C水平 | 第56-58页 |
| ·糖尿病人的Cat S和Cystatin C水平 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·小鼠Cat R基因的表达分布和转录起始位点的确定 | 第63-65页 |
| ·小鼠Cat R mRNA特异表达于胎盘 | 第63-64页 |
| ·小鼠Cat R mRNA的转录起始 | 第64-65页 |
| 5 第一部分总结 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-72页 |
| 第二部分 棉铃虫组织蛋白酶L在棉铃虫幼虫蜕皮和脂肪体解离中的作用 | 第72-111页 |
| 1 综述 | 第72-76页 |
| ·昆虫半胱氨酸蛋白酶在胚胎发育中的作用 | 第73-74页 |
| ·在卵黄蛋白降解中的作用 | 第73-74页 |
| ·参与发育中卵巢的重建 | 第74页 |
| ·昆虫半胱氨酸蛋白酶在变态发育中的作用 | 第74-76页 |
| ·参与变态发育期间幼虫组织的解离 | 第74-75页 |
| ·参与成虫盘的分化及脑基膜降解 | 第75-76页 |
| 2 实验内容与研究意义 | 第76-79页 |
| ·研究背景与意义 | 第76-78页 |
| ·棉龄虫Cat L在昆虫蜕皮中的功能研究 | 第76-77页 |
| ·棉铃虫Cat L在脂肪体解离中的功能研究 | 第77-78页 |
| ·实验流程 | 第78-79页 |
| 3 材料与方法 | 第79-86页 |
| ·棉铃虫的饲养和基本操作 | 第79页 |
| ·组织和血淋巴的收集 | 第79页 |
| ·蛋白的制备 | 第79页 |
| ·Cathepsins活性和抑制分析 | 第79-80页 |
| ·PCR、RACE与相应引物 | 第80-81页 |
| ·用于中间片段扩增的PCR条件与引物 | 第80页 |
| ·RACE cDNA第一链合成 | 第80页 |
| ·用于RACE 5’与3’扩增的PCR条件与引物 | 第80-81页 |
| ·用于原和表达的引物 | 第81页 |
| ·用于竞争性RT-PCR的PCR条件与引物 | 第81页 |
| ·DNA胶回收 | 第81页 |
| ·克隆的基本方法 | 第81-82页 |
| ·连接反应 | 第81页 |
| ·感受态细胞制备 | 第81页 |
| ·转化 | 第81-82页 |
| ·质粒DNA小量抽提(煮沸法) | 第82页 |
| ·质粒DNA大量抽提(碱裂解法) | 第82-83页 |
| ·竞争性RT-PCR | 第83页 |
| ·截短的Har-CL(T-HarCL)产生 | 第83页 |
| ·反转录 | 第83页 |
| ·PCR及Southern blotting | 第83页 |
| ·原核表达及纯化 | 第83-84页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第83页 |
| ·小规模诱导表达 | 第83页 |
| ·大规模培养并制样 | 第83-84页 |
| ·Ni柱纯化 | 第84页 |
| ·抗体的制备 | 第84页 |
| ·免疫动物 | 第84页 |
| ·抗血清的收集 | 第84页 |
| ·ELISA测抗体效价(采用间接法) | 第84-85页 |
| ·Western blot | 第85页 |
| ·整体免疫组化 | 第85页 |
| ·蜕皮激素含量的测定 | 第85页 |
| ·E64d和CLIK148的注射 | 第85页 |
| ·数据的统计和分析 | 第85-86页 |
| 4 结果与讨论 | 第86-108页 |
| ·棉龄虫Cat L在昆虫蜕皮中的功能研究 | 第86-100页 |
| ·结果 | 第86-96页 |
| ·在不同幼虫期Cathepsin活性的分析 | 第86-87页 |
| ·全长Har-CL cDNA的分离 | 第87-88页 |
| ·Har-CL cDNA结构 | 第88页 |
| ·Har-CL蛋白的重组表达与抗体制备 | 第88-91页 |
| ·Har-CL的组织分布 | 第91-92页 |
| ·Har-CL在幼虫发育期间的表达 | 第92-95页 |
| ·血淋巴Har-CL蛋白和蜕皮激素效价在幼虫发育期间的变化 | 第95页 |
| ·Cat L对5到6龄蜕皮的作用 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-100页 |
| ·棉铃虫Cat L在脂肪体解离中的作用 | 第100-108页 |
| ·结果 | 第100-104页 |
| ·脂肪体中的Cathepsins活性变化 | 第100页 |
| ·Har-CLmRNA和蛋白在滞育型和非滞育型脂肪体中的表达 | 第100页 |
| ·Har-CL在滞育型和非滞育型脂肪体中的定位 | 第100-103页 |
| ·Har-CL在滞育和非滞育型血淋巴中的浓度和活性变化 | 第103-104页 |
| ·讨论 | 第104-108页 |
| 5 结论 | 第108-109页 |
| 6 参考文献 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 博士期间发表和待发表的论文 | 第112-113页 |
| 附录 | 第113-116页 |
