| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 第一章 结肠癌靶向基因病毒治疗概述 | 第14-19页 |
| ·结肠癌治疗的研究现状 | 第14-15页 |
| ·溶瘤腺病毒应用于肿瘤基因治疗研究进展 | 第15-16页 |
| ·癌胚抗原启动子 CEA 应用于结肠癌靶向基因病毒治疗 | 第16-17页 |
| ·肿瘤抑制基因 ST13 应用于结肠癌靶向基因病毒治疗 | 第17-19页 |
| 第二章 CEA 介导的携带 ST13 基因的溶瘤腺病毒治疗结肠癌的研究 | 第19-69页 |
| ·实验材料 | 第19-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·腺病毒 | 第19页 |
| ·工具酶及生化试剂 | 第19-20页 |
| ·抗体 | 第20-21页 |
| ·细胞株 | 第21页 |
| ·主要溶液的配制 | 第21-23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23-25页 |
| ·合成引物序列 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-45页 |
| ·重组质粒p Ad·(ST13)CEA·E1A(△24)的构建的基本方法 | 第25-29页 |
| ·质粒DNA 的小量抽提 | 第25-26页 |
| ·DNA 的电泳与回收 | 第26-27页 |
| ·酶切与连接 | 第27页 |
| ·氯化钙法制备感受态及DNA 的转化 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA 的大量抽提 | 第28-29页 |
| ·质粒pAd·（ST13）CEA·E1A_(△24)的构建 | 第29-32页 |
| ·CEA 启动子的克隆 | 第29页 |
| ·CEA 片段与T 载体的连接反应 | 第29-30页 |
| ·pAd·CEA·E1A_(△24)的构建 | 第30-31页 |
| ·质粒pAd·（ST13）CEA·E1A_(△24)的构建 | 第31页 |
| ·质粒pAd·（ST13）CEA·E1A_(△24)的鉴定 | 第31-32页 |
| ·细胞培养与重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的产生 | 第32-38页 |
| ·细胞培养与冻存 | 第32-34页 |
| ·重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的包装 | 第34页 |
| ·重组腺病毒的鉴定 | 第34-36页 |
| ·重组腺病毒的大量扩增与纯化 | 第36-37页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第37-38页 |
| ·重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的体外实验 | 第38-39页 |
| ·细胞形态学观察实验 | 第38页 |
| ·MTT 检测细胞存活率 | 第38-39页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第39页 |
| ·重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的体内实验 | 第39-43页 |
| ·结肠癌SW620 荷瘤裸鼠模型的建立及瘤内注射给药 | 第39-40页 |
| ·给药肿瘤组织的免疫组化实验检测 | 第40-41页 |
| ·石蜡组织切片的HE 染色检测 | 第41页 |
| ·TUNEL 法检测细胞凋亡 | 第41-42页 |
| ·肿瘤抑制曲线及荷瘤裸鼠存活曲线的绘制 | 第42页 |
| ·给药肿瘤组织的透射电镜观察实验 | 第42页 |
| ·肝功能指标检测 | 第42-43页 |
| ·Western Blot 探讨重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的抗肿瘤机制 | 第43-45页 |
| ·统计学分析 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-65页 |
| ·重组质粒p Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的鉴定 | 第45-48页 |
| ·质粒pMD18-T-ST13 的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·质粒pXC2·CEA·E1A_(△24)的鉴定 | 第46-47页 |
| ·质粒pAd·(ST13)CEA·E1A_(△24)的PCR 鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组溶瘤腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的结构 | 第48页 |
| ·重组病毒Ad·(ST13)CEA·E1A_(△24)的鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的体外抗瘤效果评价 | 第49-55页 |
| ·MTT 体外实验初步证实重组病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)具有更强的结肠癌特异性杀伤能力 | 第49-52页 |
| ·MTT 体外实验初步证实重组病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)对正常细胞毒性较低 | 第52-53页 |
| ·细胞形态学实验观察重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的杀伤能力和安全性 | 第53-54页 |
| ·流式细胞术检测目的病毒诱导细胞凋亡 | 第54-55页 |
| ·重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的体内抗瘤效果评价 | 第55-62页 |
| ·重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)能有效抑制荷瘤裸鼠的肿瘤生长 | 第55-58页 |
| ·透射电镜观察重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)诱导的裸鼠体内肿瘤组织的细胞凋亡 | 第58-59页 |
| ·免疫组化、HE 染色和TUNEL 分析给药后的肿瘤组织 | 第59-62页 |
| ·血清酶检测重组腺病毒 Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)对肝功能损伤情况 | 第62页 |
| ·重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)的抗肿瘤机制探讨 | 第62-65页 |
| ·Western blot 检测重组腺病毒E1A 蛋白的表达 | 第62-63页 |
| ·重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)诱导凋亡的分子机制 | 第63-64页 |
| ·重组腺病毒Ad·（ST13）CEA·E1A_(△24)可能诱导细胞自噬 | 第64-65页 |
| ·讨论与展望 | 第65-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 硕士期间的研究成果 | 第74-75页 |
| 硕士期间参与项目与奖励 | 第75页 |
