| 第一章 文献综述 | 第1-29页 |
| 1 MHC的简介 | 第13-16页 |
| ·MHC的概述 | 第13页 |
| ·MHC的分类 | 第13页 |
| ·猪主要组织相容性复合物(SLA)Ⅱ类基因的研究进展 | 第13-16页 |
| ·SLA Ⅱ类基因的结构及其分布 | 第14-15页 |
| ·SLA Ⅱ类基因参与抗原递呈 | 第15页 |
| ·SLA Ⅱ类基因的多态性分析 | 第15-16页 |
| 2 DO基因的研究进展 | 第16-20页 |
| ·MHC-DO基因在其它物种中的研究进展 | 第16-17页 |
| ·HLA-DO基因 | 第17-19页 |
| ·HLA-DO基因及表达 | 第17页 |
| ·HLA-DO的功能及其对HLA-DM的调控作用 | 第17-19页 |
| ·SLA-DO基因 | 第19-20页 |
| ·SLA-DOA基因 | 第19页 |
| ·vSLA-DOB基因 | 第19-20页 |
| 3 MHC抗病性的研究进展及其应用 | 第20-27页 |
| ·HLA与疾病的相关性 | 第20-23页 |
| ·MHC与疾病易感性 | 第20页 |
| ·基因座水平的疾病相关性研究 | 第20-21页 |
| ·单体型水平的疾病相关性研究 | 第21-22页 |
| ·可能的疾病机理 | 第22-23页 |
| ·SLA免疫抗病的研究进展 | 第23-27页 |
| ·SLA与免疫应答的关联分析 | 第23-26页 |
| ·SLA与寄生虫的关联分析 | 第26页 |
| ·SLA与黑色素瘤的关联 | 第26-27页 |
| ·展望 | 第27页 |
| 4 本试验研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 SLA-DOB基因克隆、组织表达谱及原核表达 | 第29-66页 |
| 1 材料 | 第29-31页 |
| ·试验动物 | 第29页 |
| ·载体与菌株 | 第29页 |
| ·网络资源及应用软件 | 第29页 |
| ·网络资源 | 第29页 |
| ·应用软件 | 第29页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·所用溶液及其配制 | 第30-31页 |
| ·RNA提取试剂配制 | 第30页 |
| ·克隆试剂的配制 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE试剂配制 | 第30-31页 |
| 2 试验方法 | 第31-42页 |
| ·DOB1基因的克隆 | 第31-37页 |
| ·运用生物信息学的方法拼接DOB1基因 | 第31页 |
| ·引物的设计 | 第31-32页 |
| ·脾脏组织总RNA的提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR | 第32-33页 |
| ·基因cDNA的克隆及鉴定 | 第33-37页 |
| ·SLA-DOB1基因的生物信息学分析 | 第37-39页 |
| ·基因进化分析 | 第37页 |
| ·蛋白质性质分析与结构功能预测 | 第37-38页 |
| ·基于NCBI/Blast软件的蛋白质同源性及功能分析 | 第38-39页 |
| ·SLA-DOB1基因组织表达谱的研究 | 第39页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·脏器的总RNA的抽提 | 第39页 |
| ·cDNA的合成 | 第39页 |
| ·Nested-PCR | 第39页 |
| ·SLA-DOB1原核表达载体构建及表达 | 第39-42页 |
| ·pMAL-C_2X-DOB1原核表达质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·pMAL-C_2X-DOB1的表达 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-60页 |
| ·DOB1基因的克隆 | 第42-46页 |
| ·SLA-DOB1基因的电子延伸 | 第42页 |
| ·所得序列部分特性预测 | 第42-43页 |
| ·脾脏组织总RNA的提取 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·电子克隆序列的验证 | 第44页 |
| ·重组菌液的PCR鉴定 | 第44页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·DOB1基因的序列测定 | 第46页 |
| ·SLA-DOB1基因的生物信息学分析 | 第46-55页 |
| ·SLA-DOB1基因进化分析 | 第46-50页 |
| ·SLA-DOB1基因蛋白质性质分析及结构功能预测 | 第50-55页 |
| ·SLA-DOB1基因的组织表达谱的研究 | 第55-56页 |
| ·1st PCR扩增琼脂糖凝胶电泳 | 第55页 |
| ·2nd PCR扩增琼脂糖凝胶电泳 | 第55-56页 |
| ·SLA-DOB1原核表达载体构建及表达 | 第56-60页 |
| ·表达引物RT-PCR扩增 | 第56页 |
| ·表达引物RT-PCR产物的酶切 | 第56页 |
| ·原核表达载体pMAL-C_2X的酶切 | 第56-57页 |
| ·转化菌的PCR鉴定 | 第57页 |
| ·重组质粒pMALC_2X-DOB1的PCR鉴定 | 第57页 |
| ·重组质粒pMAL-C_2X-DOB1的酶切鉴定 | 第57-58页 |
| ·SLA-DOB1基因的原核表达 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-65页 |
| ·SLA-DOB1基因的电子克隆 | 第60-61页 |
| ·SLA-DOB1基因在脏器中的表达 | 第61-62页 |
| ·SLA-DOB1原核表达载体构建及表达 | 第62-63页 |
| ·试验方法改进 | 第63-65页 |
| ·引物设计 | 第63-64页 |
| ·克隆测序 | 第64-65页 |
| 5.小结 | 第65-66页 |
| 第三章 SLA-DOB基因外显子2、3多态性研究 | 第66-89页 |
| 1.试验材料 | 第66-67页 |
| 2.所用仪器与试剂 | 第67-68页 |
| ·所用仪器 | 第67页 |
| ·主要试剂和药品 | 第67页 |
| ·主要试剂溶液的配制 | 第67-68页 |
| ·基因组DNA抽提试剂的配制 | 第67-68页 |
| ·SSCP试剂的配制 | 第68页 |
| ·克隆试剂的配制 | 第68页 |
| 3.实验方法 | 第68-73页 |
| ·SLA-DOB基因内含子的克隆测序 | 第68-70页 |
| ·引物设计 | 第68页 |
| ·基因组DNA的提取与纯化 | 第68-69页 |
| ·PCR扩增及产物的电泳检测 | 第69-70页 |
| ·SLA-DOB基因外显子2、3的多态性研究 | 第70-72页 |
| ·引物设计 | 第70页 |
| ·基因组DNA的提取与纯化 | 第70页 |
| ·目的片段的扩增 | 第70-71页 |
| ·单链构象多态性(SSCP)方法 | 第71-72页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第72页 |
| ·克隆测序 | 第72页 |
| ·数据处理 | 第72-73页 |
| 5 结果与分析 | 第73-86页 |
| ·SLA-DOB基因内含子 | 第73-75页 |
| ·PCR扩增结果 | 第73-74页 |
| ·内含子测序结果 | 第74-75页 |
| ·SLA-DOB基因外显子3 PCR-SSCP多态性分析 | 第75-77页 |
| ·猪基因组DNA | 第75页 |
| ·PCR扩增结果 | 第75-76页 |
| ·SLA-DOB基因外显子的SSCP多态性分析 | 第76-77页 |
| ·PCR-SSCP等位基因频率分析 | 第77-79页 |
| ·SLA-DOB基因外显子3基因测序结果 | 第79-81页 |
| ·6品种小型猪SLA-DOB基因外显子3序列的碱基组成 | 第81页 |
| ·氨基酸序列变异的分析 | 第81-83页 |
| ·氨基酸的组成含量分析 | 第81页 |
| ·氨基酸位点的变异分析 | 第81-82页 |
| ·SLA-DOB1基因外显子3密码子使用偏倚性(Bias) | 第82-83页 |
| ·SLA-DOB基因的分子系统发育分析 | 第83-86页 |
| ·SLA-DOB等位基因树和命名 | 第83-84页 |
| ·猪DOB基因与不同物种DOB基因序列间的比较 | 第84-86页 |
| 6 讨论 | 第86-88页 |
| ·SLA-DOB基因内含子的扩增 | 第86页 |
| ·6品种小型猪群体SLA-DOB基因PCR-SSCP多态性 | 第86-87页 |
| ·SLA-DOB基因外显子3序列分析及分子系统发育分析 | 第87页 |
| ·猪SLA-DOB基因等位基因间的基因树和命名 | 第87-88页 |
| 7 小结 | 第88-89页 |
| 全文总结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 附录一：猪SLA-DOB1基因在Genbank中的登录号和序列 | 第96-97页 |
| 附录二 载体质粒PMD 18-T的物理图谱及多克隆位点的核苷酸序列 | 第97页 |
| 附录三 原核表达载体pMAL-C_2X的物理图谱及多克隆位点的核苷酸序列 | 第97-98页 |
| 附录四 重组质粒PMD-DOB1构建试验路线图 | 第98页 |
| 附录五 原核表达质粒pMAL-C_2X-DOB1构建试验路线图 | 第98-99页 |
| 简历及攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第99页 |
