| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 1 引言 | 第7-20页 |
| 1．1 转基因作物的发展趋势 | 第7-8页 |
| 1．1．1 全球转基因作物发展趋势 | 第7-8页 |
| 1．1．2 中国转基因植物发展趋势 | 第8页 |
| 1．2 转基因国内外管理的现状 | 第8页 |
| 1．3 转基因作物定量方法国内外研究的现状 | 第8-10页 |
| 1．3．1 传统的定量方法简介 | 第8-10页 |
| 1．4 蛋白质定量检测方法 | 第10页 |
| 1．5 实时荧光 PCR检测和定量技术 | 第10-17页 |
| 1．5．1 实时荧光 PCR检测技术 | 第10-14页 |
| 1．5．2 实时荧光 PCR定量的原理和理论基础 | 第14-17页 |
| 1．6 定量标准物质 | 第17页 |
| 1．7 转基因含量的计算方法 | 第17-18页 |
| 1．7．1 序列的选择 | 第17-18页 |
| 1．7．2 转基因成分的计算 | 第18页 |
| 1．8 本论文研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 2 TaqMan探针实时荧光PCR定量检测抗草甘膦大豆 | 第20-32页 |
| 2．1 材料 | 第20页 |
| 2．2 仪器和试剂 | 第20页 |
| 2．3 方法 | 第20-27页 |
| 2．3．1 培养基及溶液的配制 | 第20-21页 |
| 2．3．2 植物基因组 DNA的提取 | 第21页 |
| 2．3．3 PCR扩增抗草甘膦大豆的35s、Nos、Lectin序列 | 第21-22页 |
| 2．3．4 Nest-PCR扩增35s边界序列、Nos边界序列的区间 | 第22-23页 |
| 2．4．5 克隆和转化 | 第23-24页 |
| 2．4．6 重组质粒的提取和酶切 | 第24-26页 |
| 2．4．7 Lectin基因与抗草甘膦大豆外源片段之间的连接 | 第26-27页 |
| 2．5 质粒图谱 | 第27页 |
| 2．6 质粒拷贝数的确定 | 第27-28页 |
| 2．6．1 质粒的纯化 | 第27-28页 |
| 2．6．2 质粒拷贝数的确定 | 第28页 |
| 2．7 种子标准品的来源 | 第28页 |
| 2．8 实时荧光 PCR定量检测抗草甘膦大豆 | 第28-29页 |
| 2．8．1 TaqMan探针与引物的设计和合成 | 第28-29页 |
| 2．8．2 实时荧光 PCR用的引物和探针的序列 | 第29页 |
| 2．9 实时荧光PCR定量检测 | 第29-32页 |
| 2．9．1 反应体系 | 第29页 |
| 2．9．2 样品检测 | 第29-30页 |
| 2．9．3 标准曲线的确定 | 第30页 |
| 2．9．4 C_f值的计算 | 第30页 |
| 2．9．5 实时荧光 PCR定量检测分析方法 | 第30-31页 |
| 2．9．6 C_f值的验证 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-39页 |
| 3．1 核酸含量的测定 | 第32页 |
| 3．2 PCR扩增的结果 | 第32页 |
| 3．3 PCR产物的克隆和酶切鉴定 | 第32-34页 |
| 3．3．1 重组质粒的 PCR和酶切鉴定 | 第32-34页 |
| 3．3．2 亚克隆质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| 3．4 核酸序列的测定和分析 | 第34-35页 |
| 3．4．2 酶切图谱分析 | 第34页 |
| 3．4．3 酶切图谱 | 第34-35页 |
| 3．5 实时荧光 PCR体系优化 | 第35-37页 |
| 3．5．1 引物浓度优化 | 第35页 |
| 3．5．2 Mg~(2+)浓度优化 | 第35-36页 |
| 3．5．3 Taq酶用量和dNTP浓度的优化 | 第36页 |
| 3．5．4 实时荧光 PCR检测的灵敏度 | 第36-37页 |
| 3．6 C_f值的计算 | 第37-39页 |
| 3．6．1 C_f值 | 第37-38页 |
| 3．6．2 C_f值的验证结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-44页 |
| 4．1 关于核酸的提取、纯化与pcR抑制剂的去除 | 第39页 |
| 4．2 关于 PCR反应条件的优化 | 第39-40页 |
| 4．3 关于 PCR产物的克隆及序列测定 | 第40页 |
| 4．4 关于重组质粒的酶切及酶切后的亚克隆 | 第40页 |
| 4．5 探针和引物序列的选择 | 第40-41页 |
| 4．7 影响探针检测灵敏度的几个可能因素 | 第41页 |
| 4．8 UNG酶及实验室的核酸污染问题 | 第41-42页 |
| 4．9 实时荧光PCR定量检测 | 第42-44页 |
| 4．9．1 关于标准质粒的分子 | 第42页 |
| 4．9．2 定量的范围 | 第42页 |
| 4．9．3 种子的准确率 | 第42页 |
| 4．9．4 C_f值的影响因素 | 第42-43页 |
| 4．9．5 关于标准曲线 | 第43-44页 |
| 5 总结论 | 第44-45页 |
| 缩写词 | 第45-46页 |
| 测序结果 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 个人简历 | 第52-53页 |
| 导师简历 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-59页 |
