| 第一章 文献综述 | 第1-21页 |
| ·钙转运系统 | 第12-18页 |
| ·Ca~(2+)外向转运系统 | 第12-16页 |
| ·钙离子内向转运系统—Ca~(2+)通道 | 第16-18页 |
| ·钙信号 | 第18-19页 |
| ·Ca~(2+)转运系统在植物营养元素分配中的作用 | 第19-20页 |
| ·选题题依据和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 水稻Ca~(2+)／H~+反向转运体基因OsCAX3的克隆及序列分析 | 第21-31页 |
| ·材料与方法 | 第21-26页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·所需试剂 | 第21-22页 |
| ·TRlzol试剂提取总RNA | 第22页 |
| ·异硫氰酸胍法 | 第22页 |
| ·反转录cDNA的合成 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第23-24页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第24页 |
| ·提取质粒DNA | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·细菌的转化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| ·结果与分析 | 第26-29页 |
| ·水稻Ca~(2+)／H~+反向转运体基因OsCAX3的克隆 | 第26-27页 |
| ·OsCAX3与其它反向Ca~(2+)／H~+转运体的氨基酸序列同源性分析 | 第27页 |
| ·水稻OsCAX3亲水性分析及跨膜区预测 | 第27-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 OsCAX3表达特性和亚细胞定位分析 | 第31-41页 |
| ·材料与方法 | 第31-36页 |
| ·植物材料和细菌菌株 | 第31页 |
| ·质粒载体 | 第31-32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·所用仪器 | 第32页 |
| ·水稻幼苗的处理 | 第32页 |
| ·RT-PCR | 第32页 |
| ·瞬时表达载体和稳定表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33页 |
| ·W5溶液的配置 | 第33页 |
| ·拟南芥叶肉细胞原生质体的提取和转化 | 第33页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第34页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第34页 |
| ·烟草转化 | 第34页 |
| ·基因组DNA的提取(SDS法) | 第34-35页 |
| ·PCR鉴定 | 第35-36页 |
| ·荧光的观察 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-40页 |
| ·OsCAX3在水稻不同组织中的表达特性 | 第36页 |
| ·外源Ca~(2+)对OsCAX3表达的诱导 | 第36页 |
| ·外源K~+、Na~+、Mn~(2+)、Mg~(2+)、PEG和4℃对OsCAX3表达的诱导 | 第36-37页 |
| ·pBI221-OsCAX3-GFP瞬时表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·pEZTNL35S-OsCAX3-GFP稳定表达载体的构建 | 第38页 |
| ·OsCAX3-GFP定位在拟南芥叶肉细胞原生质体的质膜上 | 第38-39页 |
| ·OsCAX3-GFP定位在转基因烟草的表皮细胞的细胞膜上 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·OsCAX3的表达特性 | 第40页 |
| ·OsCAX3的亚细胞定位 | 第40-41页 |
| 第四章 OsCAX3转基因酵母的功能分析 | 第41-50页 |
| ·材料与方法 | 第41-44页 |
| ·菌株和载体 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第42页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第42-43页 |
| ·酵母的转化 | 第43页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第43页 |
| ·阳性酵母菌落的鉴定 | 第43-44页 |
| ·酵母的Ca~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)、Ni~(2+)、Na~+、Zn~(2+)耐受性分析 | 第44页 |
| ·酵母在培养液中的Ca~(2+)耐受性分析 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-48页 |
| ·pYES2-OsCAX3酵母表达载体的构建与鉴定 | 第44-46页 |
| ·转基因酵母阳性菌株质粒PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·OsCAX3转基因酵母在培养基中的Ca~(2+)、Mn~(2++)耐受性分析 | 第47页 |
| ·OsCAX3转基因酵母在培养基中的Cu~(2+)、Ni~(2+)、Na~+、Zn~(2+)耐受性分析 | 第47-48页 |
| ·OsCAX3转基因酵母在培养液中的Ca~(2+)耐受性分析 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·酵母液泡膜上的Ca~(2+)转运体器 | 第48页 |
| ·用酵母突变体研究Ca~(2+)／H~+反向转运体的功能 | 第48-49页 |
| ·OsCAX3的离子转运特异性 | 第49-50页 |
| 第五章 OsCAX3转基因烟草的表型分析 | 第50-57页 |
| ·材料与方法 | 第50-51页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·工程菌与质粒载体 | 第50页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第50页 |
| ·常用培养基 | 第50页 |
| ·重组表达载体pBI121-OsCAX3的构建与鉴定 | 第50-51页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第51页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第51页 |
| ·用于转化烟草的农杆菌菌液的准备 | 第51页 |
| ·烟草的转化(同3.1.13) | 第51页 |
| ·转基因烟草Ca~(2+)耐受性分析 | 第51页 |
| ·烟草中Ca~(2+)含量的测定 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-55页 |
| ·pBI121-OsCAX3的构建与鉴定 | 第51-52页 |
| ·pBI121-OsCAX3转化农杆菌 | 第52-53页 |
| ·pBI121-OsCAX3转化烟草及阳性苗鉴定 | 第53-54页 |
| ·烟草的Ca~(2+)的耐受性分析 | 第54-55页 |
| ·烟草中Ca~(2+)含量的测定 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第六章 N端参与了OsCAX3的Ca~(2+)转运功能的调控 | 第57-63页 |
| ·材料与方法 | 第57-58页 |
| ·菌株和载体 | 第57页 |
| ·OsCAX3 N端序列的分析 | 第57页 |
| ·s10sCAX3、s20sCAX3、s30sCAX3 cDNA片段的获得 | 第57页 |
| ·酵母表达载体的构建，酵母感受态细胞的制备以及酵母的转化 | 第57-58页 |
| ·酵母的Ca~(2+)耐受性分析 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-61页 |
| ·OsCAX3 N端序列的分析 | 第58页 |
| ·pYES2-s10sCAX3、pYES2-s20sCAX3、pYES2-s30sCAX3载体的构建和鉴定 | 第58-60页 |
| ·转基因酵母阳性斑的PCR鉴定 | 第60-61页 |
| ·转基因酵母的Ca~(2+)耐受性分析 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
