| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| ·角蛋白的研究进展 | 第9-12页 |
| ·角蛋白的分子结构 | 第9-11页 |
| ·角蛋白的资源化利用 | 第11-12页 |
| ·角蛋白酶的研究进展 | 第12-16页 |
| ·产角蛋白酶的微生物 | 第12-13页 |
| ·角蛋白酶的理化性质 | 第13-14页 |
| ·角蛋白酶的降解机理 | 第14-15页 |
| ·角蛋白酶编码基因的克隆及其异源表达 | 第15-16页 |
| ·角蛋白酶的应用前景及展望 | 第16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第16-19页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第16-17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达菌株和载体 | 第17-18页 |
| ·影响外源基因在巴斯德毕氏酵母中表达的因素 | 第18-19页 |
| ·本研究的前期工作、目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-37页 |
| ·材料 | 第20-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·常用缓冲液 | 第22-23页 |
| ·角蛋白酶酶活力测定试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-37页 |
| ·角蛋白酶基因kerC重组表达载体的构建 | 第24-31页 |
| ·重组表达载体pPICZαA-kerC的电击转化 | 第31-32页 |
| ·高效表达菌株的筛选 | 第32-34页 |
| ·重组菌株的诱导时间和甲醇浓度的优化 | 第34页 |
| ·重组菌株的遗传稳定性分析 | 第34页 |
| ·P.pastoris X-33诱导表达的角蛋白酶的酶学性质分析 | 第34-36页 |
| ·重组角蛋白酶的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-47页 |
| ·重组表达载体pPICZαA-kerC的构建 | 第37-40页 |
| ·kerC基因表达片段的高保真酶扩增 | 第37页 |
| ·T-kerC阳性转化子的筛选 | 第37-39页 |
| ·pPICZαA质粒与kerC基因的连接 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌DH5α中重组表达载体pPICZαA-kerC阳性转化子的筛选 | 第40页 |
| ·重组表达载体pPICZαA-kerC的转化和毕赤酵母X-33阳性转化子的筛选 | 第40-41页 |
| ·重组菌株P.X.KC-9的诱导表达 | 第41-43页 |
| ·重组菌株的遗传稳定性分析 | 第43页 |
| ·P.X.KC-9表达的角蛋白酶的酶学性质分析 | 第43-46页 |
| ·重组角蛋白酶最适反应温度的测定 | 第43-44页 |
| ·重组角蛋白酶热稳定性的测定 | 第44页 |
| ·重组角蛋白酶最适反应pH的测定 | 第44-45页 |
| ·重组角蛋白酶pH稳定性的测定 | 第45-46页 |
| ·金属离子对重组角蛋白酶的影响 | 第46页 |
| ·重组角蛋白酶的SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| ·角蛋白酶酶基因的克隆及表达 | 第47-48页 |
| ·重组菌株的筛选及其诱导表达 | 第48-49页 |
| ·重组角蛋白酶的酶学性质分析 | 第49-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
