| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 论文缩略词表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 背景与综述 | 第12-31页 |
| 1. 转基因动物研制技术进展 | 第12-19页 |
| ·转基因动物的概述 | 第12页 |
| ·转基因动物的研制方法 | 第12-16页 |
| ·转基因动物的应用 | 第16-19页 |
| 2. 动物体内的转基因定位整合研究进展 | 第19-22页 |
| 3. 鲑鱼降钙素重组表达研究进展 | 第22-29页 |
| ·降钙素蛋白及其基因 | 第22-23页 |
| ·降钙素的药理作用 | 第23-26页 |
| ·降钙素的制备 | 第26-29页 |
| ·降钙素酰胺化 | 第29页 |
| 4. 研究思路 | 第29-31页 |
| 第二章 鲑鱼降钙素随机整合转基因山羊的研制 | 第31-53页 |
| 前言 | 第31页 |
| 1. 材料 | 第31-33页 |
| ·菌种 | 第31页 |
| ·质粒载体、引物及检测 | 第31-32页 |
| ·主要试剂材料 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 2. 方法 | 第33-45页 |
| ·鲑鱼降钙素基因合成 | 第33页 |
| ·鲑鱼降钙素乳腺特异表达框架的构建 | 第33-37页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的分离和培养 | 第37页 |
| ·电转化 | 第37-39页 |
| ·整合细胞克隆的挑选与鉴定 | 第39-40页 |
| ·卵母细胞制备与受体羊的同步 | 第40-41页 |
| ·体细胞克隆用细胞株的准备 | 第41页 |
| ·重构卵的制备与激活 | 第41-42页 |
| ·重构卵的包埋、回收与发育胚胎的移植 | 第42-44页 |
| ·流产胎儿的整合检测 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-51页 |
| ·乳腺特异表达鲑鱼降钙素框架的构建 | 第45-47页 |
| ·pBLG-sct整合细胞的获得 | 第47-50页 |
| ·体细胞克隆 | 第50页 |
| ·流产胎儿的整合检测 | 第50-51页 |
| 4. 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 TAT-CRE介导山羊成纤维细胞内标记基因的删除效率研究 | 第53-65页 |
| 前言 | 第53页 |
| 1. 材料 | 第53-54页 |
| ·细胞 | 第53-54页 |
| ·菌种 | 第54页 |
| ·质粒载体、引物及检测 | 第54页 |
| ·主要试剂材料 | 第54页 |
| ·主要实验仪器 | 第54页 |
| 2. 方法 | 第54-58页 |
| ·TAT-cre酶的表达纯化 | 第54-55页 |
| ·纯化后的TAT-cre酶的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第55页 |
| ·TAT-cre酶的浓缩 | 第55-56页 |
| ·TAT-cre酶浓度的测定 | 第56页 |
| ·TAT-cre酶体内活性的检测 | 第56页 |
| ·TAT-cre酶细胞内删除效率的检测 | 第56-58页 |
| 3. 结果 | 第58-63页 |
| ·TAT-cre的纯化 | 第58页 |
| ·TAT-cre酶的浓缩 | 第58-59页 |
| ·TAT-cre酶浓度的测定 | 第59-60页 |
| ·TAT-cre酶的体外活性检测 | 第60页 |
| ·TAT-cre酶的细胞内删除活性检测 | 第60-61页 |
| ·TAT-Cre酶对标记基因的删除效率检测 | 第61-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 鲑鱼降钙素乳腺特异表达载体的定位整合研究 | 第65-74页 |
| 前言 | 第65页 |
| 1. 材料 | 第65-66页 |
| ·细胞 | 第65页 |
| ·菌种 | 第65-66页 |
| ·质粒载体、引物及检测 | 第66页 |
| ·主要试剂材料 | 第66页 |
| ·主要实验仪器 | 第66页 |
| 2. 方法 | 第66-70页 |
| ·双loxp位点的人工合成 | 第66页 |
| ·p2xGsct的构建 | 第66-67页 |
| ·筛选基因Zeocin的扩增及Ta载体克隆 | 第67页 |
| ·p2xGsct-zeo的构建 | 第67-68页 |
| ·TAT-cre介导p2xGsct-zeo的脂质体转染溶菌酶转基因山羊的耳成纤维细胞 | 第68-69页 |
| ·TAT-cre酶介导载体p2xGsct-zeo电传孔转染人溶菌酶转基因山羊胎儿成纤维细胞 | 第69-70页 |
| 3. 结果 | 第70-73页 |
| ·p2xGsct-zeo的构建 | 第70-71页 |
| ·脂质体转染溶菌酶转基因羊胎儿成纤维细胞 | 第71-72页 |
| ·电穿孔转染溶菌酶转基因羊胎儿成纤维细胞 | 第72-73页 |
| 4. 讨论 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 溶液配方 | 第83-84页 |
