| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-22页 |
| 1．1 病毒基因组结构及其复制 | 第9-11页 |
| 1．1．1 基因组结构 | 第9-10页 |
| 1．1．2 病毒复制 | 第10-11页 |
| 1．2 流感病毒毒力和宿主特异性的分子生物学基础 | 第11-12页 |
| 1．3 流感病毒的遗传变异 | 第12-14页 |
| 1．3．1 抗原性变异 | 第12-13页 |
| 1．3．2 病毒基因组变异 | 第13-14页 |
| 1．4 禽流感的诊断 | 第14-17页 |
| 1．4．1 病毒的分离鉴定 | 第14页 |
| 1．4．2 血清学诊断技术的研究现状及进展 | 第14-16页 |
| 1．4．3 禽流感分子生物学诊断技术研究进展 | 第16-17页 |
| 1．5 禽流感的防制 | 第17-19页 |
| 1．5．1 灭活疫苗 | 第17页 |
| 1．5．2 重组禽痘病毒载体疫苗 | 第17-18页 |
| 1．5．3 DNA疫苗 | 第18页 |
| 1．5．4 亚单位苗 | 第18-19页 |
| 1．6 禽流感公共卫生意义以及与人类健康 | 第19-22页 |
| 2 研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-35页 |
| 3．1 材料 | 第23-27页 |
| 3．1．1 病毒、菌种和质粒 | 第23页 |
| 3．1．2 酶及主要试剂 | 第23页 |
| 3．1．3 血清和酶标抗体 | 第23-25页 |
| 3．1．4 主要试剂及溶液的配制 | 第25-27页 |
| 3．2 方法 | 第27-35页 |
| 3．2．1 引物 | 第27页 |
| 3．2．2 病毒 RNA的提取 | 第27-28页 |
| 3．2．3 RT-PCR扩增与检测 | 第28页 |
| 3．2．4 RT-PCR产物的回收与纯化 | 第28-29页 |
| 3．2．5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 3．2．6 连接产物的转化 | 第29页 |
| 3．2．7 质粒的制备 | 第29-30页 |
| 3．2．8 重组质粒的鉴定与序列分析 | 第30页 |
| 3．2．9 H5HA、H9HA基因的亚克隆及缺失修饰 | 第30-31页 |
| 3．2．10 重组表达质粒的构建 | 第31页 |
| 3．2．11 诱导表达 | 第31页 |
| 3．2．12 SDS-PAGE电泳 | 第31页 |
| 3．2．13 Western blot | 第31-32页 |
| 3．2．14 包涵体提取 | 第32页 |
| 3．2．15 ELISA方法的建立与临床应用 | 第32-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-48页 |
| 4．1 H5、H9亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与序列分析 | 第35-40页 |
| 4．1．1 H5、H9亚型禽流感病毒血凝素基因的扩增 | 第35页 |
| 4．1．2 克隆质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 4．1．3 HA基因的序列测定分析及系统发育进化树 | 第36-40页 |
| 4．2 HA基因的亚克隆及缺失修饰 | 第40页 |
| 4．3 H5、H9亚型禽流感基因基因原核表达载体的构建 | 第40-43页 |
| 4．5 ELISA检测方法的建立与临床应用 | 第43-48页 |
| 4．5．1 ELISA最适条件及阴阳界限的确定 | 第43-44页 |
| 4．5．2 重复性试验 | 第44页 |
| 4．5．3 特异性试验 | 第44-45页 |
| 4．5．4 特异性、敏感性与符合率试验 | 第45-46页 |
| 4．5．5 临床送检血清的间接 ELISA检测结果 | 第46-48页 |
| 5 讨论 | 第48-52页 |
| 5．1 禽流感病毒 HA基因的克隆及序列分析 | 第48-49页 |
| 5．2 禽流感病毒 HA基因表达及产物的提取 | 第49页 |
| 5．3 包涵体的提取及溶解复性 | 第49-50页 |
| 5．4 ELISA诊断方法的建立与临床应用 | 第50-51页 |
| 5．5 小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59页 |
