| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 防御素基因的克隆 | 第14-38页 |
| 1 材料 | 第14-15页 |
| 1．1 实验材料 | 第14页 |
| 1．2 菌株和载体 | 第14-15页 |
| 1．3 试剂 | 第15页 |
| 1．4 试剂配方 | 第15页 |
| 2 方法 | 第15-20页 |
| 2．1 引物设计 | 第15-16页 |
| 2．2 兰花子、白芥总 RNA提取 | 第16页 |
| 2．3 第一链cDNA的合成 | 第16-17页 |
| 2．4 基因片段扩增 | 第17-18页 |
| 2．4．1 反应体系 | 第17页 |
| 2．4．2 反应参数 | 第17-18页 |
| 2．4．3 扩增片断的检测 | 第18页 |
| 2．5 PCR产物的回收 | 第18页 |
| 2．6 基因克隆 | 第18-20页 |
| 2．6．1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| 2．6．2 PCR回收产物的克隆 | 第19-20页 |
| 2．6．3 测序 | 第20页 |
| 3 结果与分析 | 第20-35页 |
| 3．1 白芥、兰花子种子总 RNA的提取 | 第20-21页 |
| 3．2 白芥、兰花子防御素基因的扩增 | 第21-22页 |
| 3．3 重组质粒鉴定 | 第22页 |
| 3．4 白芥、兰花子cDNA的序列及氨基酸序列推导 | 第22-23页 |
| 3．5 基因序列分析 | 第23-28页 |
| 3．6 蛋白质序列分析 | 第28-35页 |
| 3．6．1 氨基酸组成 | 第28-29页 |
| 3．6．2 信号肽序列分析 | 第29-31页 |
| 3．6．3 氨基酸成熟肽序列比对 | 第31-33页 |
| 3．6．4 二硫键预测 | 第33页 |
| 3．6．5 蛋白质二级结构分析 | 第33-35页 |
| 3．6．6 防御素三级结构预测 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 第二部分 白芥防御素基因的原核表达与分离纯化 | 第38-51页 |
| 1 材料 | 第38-40页 |
| 1．1 菌株和载体 | 第38页 |
| 1．2 试剂 | 第38页 |
| 1．3 试剂配方 | 第38-40页 |
| 2 方法 | 第40-44页 |
| 2．1 表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 2．1．1 质粒提取 | 第40-41页 |
| 2．1．2 基因片段的获得 | 第41页 |
| 2．1．3 载体片段的获得 | 第41页 |
| 2．1．4 重组质粒构建 | 第41-42页 |
| 2．1．5 重组质粒的鉴定 | 第42页 |
| 2．1．6 重组质粒导入 BL21菌株 | 第42页 |
| 2．2 融合蛋白的诱导表达 | 第42-44页 |
| 2．2．1 诱导表达 | 第42-43页 |
| 2．2．2 SDS-PAGE电泳 | 第43页 |
| 2．2．3 Western-blot检测 | 第43页 |
| 2．2．4 融合蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-49页 |
| 3．1 目的片段双酶切 | 第44-45页 |
| 3．2 重组质粒的检测 | 第45-46页 |
| 3．2．1 菌落 PCR分析 | 第45页 |
| 3．2．2 双酶切分析 | 第45-46页 |
| 3．3 融合蛋白的表达 | 第46-48页 |
| 3．3．1 SDS-PAGE电泳 | 第46页 |
| 3．3．2 Western-Blot分析 | 第46-48页 |
| 3．4 融合蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 3．4．1 融合蛋白可溶性判断 | 第48页 |
| 3．4．2 蛋白质纯化 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第三部分 白芥防御素基因导入拟南芥中的研究 | 第51-61页 |
| 1 材料 | 第51-53页 |
| 1．1 实验材料 | 第51页 |
| 1．2 菌株和载体 | 第51页 |
| 1．3 试剂 | 第51页 |
| 1．4 试剂配方 | 第51-53页 |
| 2 方法 | 第53-57页 |
| 2．1 植物转基因载体的构建 | 第53-56页 |
| 2．1．1 目的基因片段的获得 | 第53-54页 |
| 2．1．2 pBI121载体的获得 | 第54-55页 |
| 2．1．3 重组质粒的构建 | 第55-56页 |
| 2．1．4 重组质粒的鉴定 | 第56页 |
| 2．2 转化农杆菌 EHA105 | 第56-57页 |
| 2．2．1 农杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第56页 |
| 2．2．2 转化农杆菌 | 第56页 |
| 2．2．3 重组质粒的鉴定 | 第56-57页 |
| 2．3 花序浸染法转拟南芥 | 第57页 |
| 2．4 转基因种子筛选 | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-59页 |
| 3．1 pBI121载体双酶切 | 第57-58页 |
| 3．2 重组质粒的鉴定 | 第58-59页 |
| 3．3 转基因拟南芥种子筛选 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 综述 植物抗菌肽研究进展 | 第61-76页 |
| 1 抗菌肽 | 第61-62页 |
| 2 植物抗菌肽 | 第62-70页 |
| 2．1 硫堇(Thionins) | 第62-63页 |
| 2．2 植物防御素(Plant defensins) | 第63-68页 |
| 2．2．1 植物防御素氨基酸的组成 | 第63-64页 |
| 2．2．2 植物防御素的结构 | 第64-65页 |
| 2．2．3 植物防御素的分类 | 第65页 |
| 2．2．4 植物防御素的产生机理 | 第65-66页 |
| 2．2．5 防御素的作用机制 | 第66-67页 |
| 2．2．6 植物防御素的生理功能 | 第67-68页 |
| 2．3 脂转移蛋白(Lipid transfer proteins，LTPs) | 第68-69页 |
| 2．4 Hevein类和Knottin类抗菌肽 | 第69页 |
| 2．5 含4个Cys的抗菌肽 | 第69-70页 |
| 3 植物抗菌肽的应用 | 第70-75页 |
| 3．1 植物抗菌肽在食品中的应用 | 第70页 |
| 3．2 植物抗菌肽在农业上的应用 | 第70-74页 |
| 3．2．1 植物抗菌肽转基因工程的应用 | 第70-72页 |
| 3．2．2 抗菌肽转基因工程局限 | 第72-74页 |
| 3．3 在医药中的应用 | 第74页 |
| 3．4 抗菌肽在畜牧业中的应用前景 | 第74-75页 |
| 4 抗菌肽应用极待解决的问题 | 第75-76页 |
| 5 问题与展望 | 第76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 在读期间发表及待发表的论文 | 第83-84页 |
| 声明 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
