| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第11-30页 |
| 1 植物基因转化的主要技术路线 | 第11-16页 |
| ·目的基因的制备和克隆 | 第12页 |
| ·克隆载体的构建及向感受态细胞导入 | 第12-14页 |
| ·粘性末端连接 | 第13页 |
| ·平末端连接 | 第13页 |
| ·同聚物加尾连接 | 第13页 |
| ·人工接头连接 | 第13-14页 |
| ·重组体的筛选和鉴定 | 第14页 |
| ·植物工程载体的构建与筛选 | 第14页 |
| ·植物基因转化受体系统和介导系统的建立 | 第14页 |
| ·转化后植物组织的筛选、再生、培育 | 第14-15页 |
| ·外源目的基因整合的鉴定 | 第15页 |
| ·外源基因表达的检测 | 第15页 |
| ·转基因植物表型、代谢及生物学鉴定 | 第15-16页 |
| ·转基因植物遗传稳定性分析、环境生态效应分析 | 第16页 |
| 2 目前油菜转基因的主要方法 | 第16-17页 |
| 3 几种常用植物基因转化方法比较 | 第17-22页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第17-19页 |
| ·根癌农杆菌T_i质粒介导遗传转化的原理 | 第17-19页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化系统在油菜育种中的应用及进展 | 第19页 |
| ·PEG法 | 第19页 |
| ·电击法 | 第19-20页 |
| ·基因枪法 | 第20页 |
| ·花粉管通道法 | 第20-21页 |
| ·注射法 | 第21页 |
| ·显微注射法 | 第21页 |
| ·直接注射法 | 第21页 |
| ·脂质体介导法 | 第21-22页 |
| 4 油菜基因转化中常用的筛选标记基因和报告基因 | 第22-23页 |
| ·选择标记基因 | 第22页 |
| ·报告基因 | 第22-23页 |
| 5 油菜转基因的遗传特性 | 第23-24页 |
| ·外源基因的表达调控 | 第23-24页 |
| ·组成型启动子 | 第23页 |
| ·器官特异性表达启动子 | 第23-24页 |
| ·损伤诱导型启动子 | 第24页 |
| ·外源基因沉默 | 第24页 |
| ·外源基因的遗传特性及传递规律 | 第24页 |
| 6 油菜转基因育种的应用 | 第24-27页 |
| ·油菜抗虫基因工程育种 | 第24-25页 |
| ·油菜抗病基因工程育种 | 第25-26页 |
| ·抗除草剂育种 | 第26-27页 |
| ·油菜作为生物反应器 | 第27页 |
| 7 半夏凝集素(PTA)等植物凝集素的抗性机理 | 第27-28页 |
| 8 菜籽油(饼)的开发利用 | 第28-29页 |
| 9 本研究的立题设想 | 第29-30页 |
| Ⅱ 材料与方法 | 第30-41页 |
| 1 实验材料 | 第30-34页 |
| ·受体材料 | 第30页 |
| ·菌株、质粒和基因 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·用于细菌培养的YEB培养基和下胚轴培养的MS基本培养基的配置 | 第31-32页 |
| ·用于下胚轴再生的培养基 | 第32页 |
| ·用于下胚轴农杆菌转化的几种培养基 | 第32页 |
| ·酶、PCR引物和药品 | 第32-33页 |
| ·酶和引物 | 第32页 |
| ·主要药品试剂 | 第32-33页 |
| ·主要实验仪器 | 第33页 |
| ·重要实验溶液 | 第33-34页 |
| ·植物基因组DNA提取液 | 第33页 |
| ·质粒DNA提取液 | 第33页 |
| ·电泳溶液 | 第33-34页 |
| ·Southern blotting溶液(1L) | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-41页 |
| ·下胚轴的再生 | 第34-35页 |
| ·无菌苗获得 | 第34页 |
| ·下胚轴的再生 | 第34-35页 |
| ·农杆菌的转化 | 第35-36页 |
| ·农杆菌的培养 | 第35页 |
| ·潮霉素敏感性试验 | 第35页 |
| ·下胚轴预培养 | 第35页 |
| ·下胚轴与农杆菌共培养 | 第35-36页 |
| ·下胚轴脱菌培养对遗传转化的影响 | 第36页 |
| ·筛选分化及生根 | 第36页 |
| ·转基因植株的移栽及大田管理 | 第36页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第36-41页 |
| ·转基因植株PCR检测 | 第36-38页 |
| ·用于PCR检测的转基因植株微量DNA提取 | 第36-37页 |
| ·PCR反应扩增体系溶液 | 第37页 |
| ·PCR引物序列、反应条件及目的片段大小 | 第37页 |
| ·PCR扩增产物的检测—琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
| ·转基因植株Southern blot检测 | 第38-41页 |
| Ⅲ 结果分析 | 第41-51页 |
| 1 油菜下胚轴再生体系的优化 | 第41-43页 |
| 2 农杆菌转化体系的优化 | 第43-46页 |
| ·潮霉素敏感性试验结果 | 第43页 |
| ·预培养对转化的影响 | 第43-44页 |
| ·农杆菌浓度、重悬及侵染时间对转化的影响 | 第44-45页 |
| ·转化后共培养时间的确定 | 第45页 |
| ·不同抗生素的脱菌效果及对下胚轴生长的影响 | 第45-46页 |
| ·AgNO_3、GA_3对芽苗分化的影响 | 第46页 |
| ·生根培养基的筛选 | 第46页 |
| 3 炼苗移栽 | 第46-47页 |
| 4 转基因Hyg抗性植株的获得及分子检测 | 第47-51页 |
| ·转基因植株PCR检测 | 第47-48页 |
| ·Southern blotting分析 | 第48-49页 |
| ·转基因植株田间表现 | 第49-51页 |
| Ⅳ 讨论 | 第51-53页 |
| 1 下胚轴可再生细胞部位的探索 | 第51页 |
| 2 AgNO3的作用机理 | 第51-52页 |
| 3 下胚轴分化再生率和转化率的相关性 | 第52页 |
| 4 外源基因的表达 | 第52-53页 |
| Ⅴ 本实验的后续设想 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 缩略词表 | 第58-59页 |
| 论文成果 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |