| 第一章 文献综述 | 第1-49页 |
| ·苹果酸-乳酸菌与酒酒球菌 | 第15-16页 |
| ·酒球菌研究中的一些热点问题 | 第16-26页 |
| ·酒球菌属的分类鉴定 | 第16-18页 |
| ·葡萄酒酿造中苹果酸-乳酸发酵的不利影响 | 第18-20页 |
| ·苹果酸-乳酸发酵过程中的含氮化合物代谢 | 第20-22页 |
| ·酒酒球菌抗性相关蛋白及抗性基因 | 第22-23页 |
| ·酒酒球菌的溶源性和其诱导的噬菌体 | 第23-24页 |
| ·酒酒球菌的物理图谱及质粒 | 第24-26页 |
| ·基因工程途径降解苹果酸的研究进展 | 第26-33页 |
| ·果酒生物降解苹果酸的途径 | 第26页 |
| ·苹果酸-乳酸发酵相关酶 | 第26-28页 |
| ·苹果酸-乳酸发酵相关基因的克隆与外源表达研究 | 第28-30页 |
| ·苹果酸-酒精发酵的相关酶、基因及外源表达 | 第30-31页 |
| ·苹果酸-乳酸酶基因和苹果酸通透酶基因共表达的研究 | 第31-33页 |
| ·存在问题 | 第33页 |
| ·酿酒酵母表达体系 | 第33-37页 |
| ·酿酒酵母载体的基本结构 | 第34页 |
| ·酵母菌的载体系统 | 第34-35页 |
| ·几个酵母载体简介 | 第35-37页 |
| ·葡萄酒酵母工程菌 | 第37-40页 |
| ·增香作用 | 第37页 |
| ·促进果胶分解 | 第37-38页 |
| ·增强葡萄酒抗氧化作用 | 第38页 |
| ·增酸作用 | 第38-39页 |
| ·基因重组酵母的问题与展望 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-49页 |
| 引言 本研究的目的意义及研究内容 | 第49-51页 |
| 第二章 酒酒球菌mleA 基因的克隆及在酿酒酵母中的转化与表达 | 第51-85页 |
| ·材料与方法 | 第52-67页 |
| ·菌株与质粒 | 第52-53页 |
| ·工具酶、抗生素及试剂 | 第53页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| ·培养基及培养条件 | 第53-55页 |
| ·缓冲液与试剂及配制 | 第55-59页 |
| ·实验方法 | 第59-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-81页 |
| ·Oenococcus oeni SD-2a 基因组 DNA 的提取 | 第67页 |
| ·O. oeni SD-2a mleA 基因的PCR 扩增 | 第67-68页 |
| ·mleA 基因的重组质粒构建 | 第68-70页 |
| ·目的基因测序 | 第70-72页 |
| ·重组表达质粒pYELmleA 的构建 | 第72-73页 |
| ·重组表达质粒pYELmleAP 的构建 | 第73-75页 |
| ·整合型重组表达质粒pYILmleA的构建 | 第75-77页 |
| ·酵母转化及转化子鉴定 | 第77-79页 |
| ·mleA 基因在酿酒酵母中表达的蛋白检测 | 第79页 |
| ·酵母转化子的斑点杂交检测 | 第79页 |
| ·mleA 基因在酿酒酵母中表达的功能检测 | 第79-81页 |
| ·小结 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 第三章 酒酒球菌mleP 基因的克隆及转化酿酒酵母的研究 | 第85-97页 |
| ·材料与方法 | 第85-88页 |
| ·菌株与质粒 | 第85-86页 |
| ·工具酶、抗生素及试剂 | 第86页 |
| ·培养基及培养条件 | 第86页 |
| ·酒酒球菌基因组DNA 的提取 | 第86页 |
| ·目的基因的PCR 扩增 | 第86-87页 |
| ·酶切、连接与测序 | 第87页 |
| ·大肠杆菌转化与质粒提取 | 第87页 |
| ·酵母转化及转化子筛选 | 第87页 |
| ·酵母转化子鉴定 | 第87页 |
| ·酵母转化子培养液上清中 L-苹果酸浓度测定 | 第87-88页 |
| ·结果与分析 | 第88-94页 |
| ·酒酒球菌SD-2a mleP 基因的PCR 扩增 | 第88页 |
| ·mleP 基因的重组质粒构建 | 第88-89页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第89-91页 |
| ·重组表达质粒pYEmleP 的构建及酶切验证 | 第91-93页 |
| ·pYEmleP 转化酿酒酵母及酵母转化子的鉴定 | 第93-94页 |
| ·mleP 基因的表达对转运培养液中 L-苹果酸能力的影响 | 第94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-97页 |
| 第四章 苹果酸-乳酸酶和苹果酸通透酶基因在酿酒酵母中的共表达 | 第97-112页 |
| ·材料与方法 | 第97-100页 |
| ·菌株与质粒 | 第97-98页 |
| ·工具酶、抗生素及试剂 | 第98页 |
| ·培养基及培养条件 | 第98页 |
| ·目的基因的PCR 及重组表达质粒的PCR 鉴定 | 第98-99页 |
| ·基因操作 | 第99页 |
| ·酵母转化及转化子筛选 | 第99页 |
| ·酵母转化子鉴定 | 第99页 |
| ·转化子的营养缺陷型检测 | 第99页 |
| ·报告基因表达的检测 | 第99页 |
| ·mleA 基因及mleP 基因的表达及共表达功能检测 | 第99-100页 |
| ·结果与分析 | 第100-110页 |
| ·重组表达质粒pGBLmleA 的构建及酶切验证 | 第100-101页 |
| ·重组表达质粒pGALmleP 的构建及酶切验证 | 第101-103页 |
| ·酵母转化及转化子鉴定 | 第103页 |
| ·共转化与转化子鉴定 | 第103-104页 |
| ·自激活检测 | 第104页 |
| ·酵母双杂交检测 | 第104-105页 |
| ·mleA 与mleP 基因表达功能检测 | 第105-110页 |
| ·小结 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-112页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第112-121页 |
| ·讨论 | 第112-117页 |
| ·酿酒酵母(S.cerevisiae)和粟酒裂殖酵母(Sz. pombe)的苹果酸代谢 | 第112-113页 |
| ·目的基因在酿酒酵母中的表达及表达的效率 | 第113-115页 |
| ·不同来源mle 和mleP 的同源性分析 | 第115-117页 |
| ·结论 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 个人简介 | 第122-123页 |
| 附录1 mleA 基因测序图谱 | 第123-126页 |
| 附录2 mleP 基因测序图谱 | 第126-128页 |
| 附录3 HPLC 色谱图 | 第128-130页 |
