| 第一章 绪论 | 第1-27页 |
| ·研究目的和意义 | 第13-14页 |
| ·国内外研究进展 | 第14-26页 |
| ·脱落酸研究进展 | 第14-18页 |
| ·RACE技术研究进展 | 第18-21页 |
| ·酵母表达系统研究进展 | 第21-26页 |
| ·研究内容和方法 | 第26-27页 |
| 第二章 脱落酸结合蛋白基因全长cDNA克隆 | 第27-45页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·试材 | 第27页 |
| ·主要化学试剂与仪器 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-36页 |
| ·材料的获取 | 第28页 |
| ·总RNA提取 | 第28-29页 |
| ·RNA产率和质量鉴定 | 第29-30页 |
| ·mRNA纯化 | 第30页 |
| ·RACE扩增 | 第30-32页 |
| ·RACE cDNA模板合成 | 第30-31页 |
| ·PCR-RACE | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶纯化特异DNA片段 | 第32-33页 |
| ·目的DNA片段的克隆及鉴定 | 第33-36页 |
| ·目的DNA片段与pGEM-T Vector连接 | 第33页 |
| ·重组质粒转化筛选 | 第33-34页 |
| ·质粒提取 | 第34-35页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-43页 |
| ·总RNA的提取及鉴定 | 第36-37页 |
| ·简并引物3′-RACE扩增 | 第37页 |
| ·简并引物扩增片段重组质粒的构建和鉴定 | 第37-39页 |
| ·简并引物扩增片段序列分析 | 第39页 |
| ·特异引物3′-RACE及其产物的克隆、酶切鉴定和测序分析 | 第39-40页 |
| ·5′-RACE扩增及其产物的克隆、酶切鉴定 | 第40-42页 |
| ·5′-RACE扩增片段序列分析 | 第42页 |
| ·3′／5′-RACE扩增片段拼接及其全序列分析 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 脱落酸结合蛋白基因在甲醇酵母中的高效表达和鉴定 | 第45-65页 |
| ·材料 | 第45-48页 |
| ·主要化学试剂 | 第45页 |
| ·常用溶液的配置 | 第45-47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-54页 |
| ·编码区基因片段的扩增、克隆及鉴定 | 第48-50页 |
| ·编码区基因片段的扩增 | 第48页 |
| ·琼脂糖凝胶纯化特异DNA片段 | 第48-49页 |
| ·目的DNA片段的克隆 | 第49页 |
| ·质粒提取及质粒酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·表达载体的构建 | 第50页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及LiCI转化 | 第50页 |
| ·小量表达 | 第50-51页 |
| ·分析表达 | 第51页 |
| ·大量表达及蛋白纯化 | 第51-52页 |
| ·亲和层析ProBond柱子的准备 | 第51-52页 |
| ·大量表达及蛋白纯化 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE | 第52-53页 |
| ·可溶性蛋白含量的测定 | 第53页 |
| ·纯化蛋白结合活性的测定 | 第53页 |
| ·纯化蛋白动力学常数的测定 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-61页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·重组表达质粒转化甲醇酵母及转化体的筛选 | 第56页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第56-60页 |
| ·纯化蛋白结合活性的测定 | 第60页 |
| ·纯化蛋白动力学常数的测定 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-65页 |
| ·外源基因在甲醇酵母中高效表达影响因素的分析 | 第61-63页 |
| ·基于ABP3400 cDNA编码蛋白质的亲疏水性及结构特点的预测分析 | 第63-65页 |
| 第四章 结论和建议 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 个人简介 | 第75页 |
