| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| ·杆状病毒的研究进展 | 第13-18页 |
| ·杆状病毒的定义、分类及特点 | 第13页 |
| ·杆状病毒的基因研究现状 | 第13-15页 |
| ·杆状病毒的用途 | 第15-18页 |
| ·Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第18-19页 |
| ·Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的原理 | 第18页 |
| ·Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的特点 | 第18-19页 |
| ·杆状病毒的基因功能研究策略 | 第19-24页 |
| ·传统的在昆虫细胞中的同源重组法 | 第19-20页 |
| ·在大肠杆菌中的Red重组法 | 第20页 |
| ·RNAi法 | 第20-24页 |
| ·本研究的目的意义和内容 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的意义 | 第24页 |
| ·本研究的主要内容 | 第24-25页 |
| 第二章 Bm4蛋白产物的亚细胞定位 | 第25-41页 |
| ·实验材料 | 第25-30页 |
| ·质粒、菌株和试剂 | 第25页 |
| ·常用缓冲液 | 第25-28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-37页 |
| ·引物设计与合成 | 第30页 |
| ·Bm4的PCR | 第30页 |
| ·连接反应 | 第30-31页 |
| ·感受态细胞制备 | 第31页 |
| ·质粒DNA转化 | 第31页 |
| ·SDS-碱裂解法小量抽提质粒DNA | 第31-32页 |
| ·质粒DNA酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·测序 | 第33页 |
| ·重组转座载体的构建 | 第33-34页 |
| ·重组Bacmid穿梭载体的构建 | 第34页 |
| ·重组Bacmid的提取 | 第34-35页 |
| ·重组Bacmid的PCR鉴定 | 第35页 |
| ·Bm细胞的培养 | 第35页 |
| ·重组Bacmid转染Bm细胞 | 第35页 |
| ·SDS—PAGE电泳 | 第35-36页 |
| ·Western-blotting | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-40页 |
| ·重组转座载体pFastBac-Bm4-EGFP的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·重组穿梭载体的PCR鉴定 | 第37-39页 |
| ·Bm4-EGFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第39页 |
| ·Bm4-EGFP的Western-blotting分析 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 改造转座载体使外源基因在iel启动子和Bm4启动子驱动下表达 | 第41-49页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·重组转座载体pFastBac-ielp-Bm4-EGFP的构建 | 第41-42页 |
| ·重组转座载体pFastBac-4p-EGFP的构建 | 第42-43页 |
| ·重组杆粒的构建和鉴定 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·重组转座载体pFastBac-ielp-Bm4-EGFP的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组转座载体pFastBac-4p-EGFP的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·重组杆粒Bacmid-ielp-Bm4-EGFP的鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组杆粒Bacmid-4p-EGFP的鉴定 | 第45-46页 |
| ·Bm4-EGFP融合蛋白在iel启动子驱动下表达 | 第46页 |
| ·EGFP在Bm4启动子驱动下表达 | 第46-47页 |
| ·Bm4启动子是一个立即早期启动子 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 Bm4的缺失 | 第49-55页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·pBluescript-ielp-EGFP的构建 | 第49页 |
| ·重组转移载体pUCRight-armLeft-armIE1PEGFP的构建 | 第49-50页 |
| ·Bm4缺失的重组杆粒病毒的获得 | 第50-51页 |
| ·杆粒病毒DNA的提取 | 第51页 |
| ·含Bm4缺失的杆粒的菌落鉴定 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·pBluescdpt-ielp-EGFP的酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·转移载体pUCRight-armLeft-armIE1PEGFP的酶切鉴定 | 第52页 |
| ·Bm4缺失重组杆粒病毒的获得 | 第52-53页 |
| ·含有Bm4缺失的杆粒的菌落鉴定 | 第53页 |
| ·Bm4缺失病毒在家蚕细胞中的复制 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 Bm4缺失后的拯救 | 第55-58页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55页 |
| ·重组转座载体pFastBac-4p-Bm4和pFastBac-ielp-Bm4的构建 | 第55页 |
| ·Bm4缺失病毒的拯救 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-57页 |
| ·重组转座载体pFastBac-4p-Bm4和pFastBac-ielp-Bm4的酶切鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组杆粒的M13引物PCR鉴定 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第六章 总结和工作展望 | 第58-59页 |
| ·总结 | 第58页 |
| ·工作展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 在学期间发表论文 | 第64页 |
