| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-31页 |
| ·甘油在细胞内的生理功能及用途 | 第11-12页 |
| ·参与能量代谢和细胞的生物质的合成 | 第11页 |
| ·渗透压调解作用 | 第11-12页 |
| ·血糖症的感应器 | 第12页 |
| ·甘油在治疗和疾病诊断中的作用 | 第12页 |
| ·甘油的工业应用 | 第12-13页 |
| ·酵母细胞中与甘油代谢相关的几个基础问题 | 第13-16页 |
| ·MAPK 信号转导途径 | 第13-14页 |
| ·甘油合成与MAPK 介导的HOG 途径 | 第14-15页 |
| ·甘油合成与细胞厌氧条件下的氧化还原调节 | 第15-16页 |
| ·酵母3-磷酸甘油脱氢酶在甘油合成中的功能 | 第16-19页 |
| ·酵母细胞甘油代谢途径 | 第16-18页 |
| ·GPD1 基因缺失或过量表达对酵母甘油合成能力的影响 | 第18页 |
| ·已克隆的酵母胞浆NAD~+-3-磷酸甘油脱氢酶编码基因 | 第18-19页 |
| ·耐高渗透压酵母法生产甘油研究进展 | 第19-21页 |
| ·立题依据与研究内容 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-31页 |
| 第二章 产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶编码基因（CgGPD）的克隆及序列分析 | 第31-51页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·材料与方法 | 第31-35页 |
| ·菌株、质粒及其培养条件 | 第31-32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·C. glycerinogenes 基因组DNA 的提取 | 第32-33页 |
| ·简并PCR | 第33页 |
| ·PCR 产物克隆 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞制备 | 第34页 |
| ·质粒DNA 的提取与验证 | 第34页 |
| ·基因组DNA 的酶切 | 第34页 |
| ·酶切片段的环化 | 第34页 |
| ·反向PCR | 第34页 |
| ·CgGPD 基因的序列测定与生物信息学分析 | 第34-35页 |
| ·Southern Blot | 第35页 |
| ·核苷酸序列号 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-46页 |
| ·简并引物PCR 扩增CgGPD 部分保守片断 | 第35-36页 |
| ·反向PCR 扩增CgGPD 基因全长序列 | 第36-37页 |
| ·CgGPD 基因的序列分析 | 第37-40页 |
| ·CgGPD 基因的遗传密码分析 | 第40-42页 |
| ·CgGPD 基因编码蛋白的亚细胞定位预测分析 | 第42页 |
| ·CgGPD 基因的多序列比对及其遗传进化 | 第42-45页 |
| ·Southern blot 分析产甘油假丝酵母的CgGPD 基因 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 第三章 产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因（CgGPD）在酿酒酵母中的表达及功能分析 | 第51-65页 |
| ·引言 | 第51-52页 |
| ·材料与方法 | 第52-56页 |
| ·菌株、质粒及其培养条件 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第53页 |
| ·转化子质粒DNA 的小量提取 | 第53页 |
| ·酵母基因组DNA 的提取 | 第53页 |
| ·表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·酿酒酵母的醋酸锂高效转化 | 第54页 |
| ·细胞粗提液的制备 | 第54-55页 |
| ·酶活的测定 | 第55页 |
| ·甘油和葡萄糖的测定 | 第55页 |
| ·生物量的测定 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-61页 |
| ·酵母表达载的构建 | 第56-57页 |
| ·CgGPD 基因在渗透压敏感突变株gpd1/gpd2 和gpd1 中表达 | 第57-59页 |
| ·渗透压冲击下CgGPD 基因表达对酵母细胞活性的影响 | 第59-60页 |
| ·CgGPD 基因受渗透压胁迫诱导表达 | 第60页 |
| ·CgGPD 基因表达提高酵母的甘油合成能力 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 第四章 胁迫条件下比较分析CgGPD、GPD1 和GPD2 基因表达 | 第65-81页 |
| ·引言 | 第65-66页 |
| ·材料与方法 | 第66-68页 |
| ·菌株、质粒及其培养条件 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66-67页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第67页 |
| ·转化子质粒DNA 的小量提取 | 第67页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第67页 |
| ·表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·酿酒酵母的醋酸锂高效转化 | 第68页 |
| ·细胞粗提液的制备和酶活的测定 | 第68页 |
| ·甘油和葡萄糖的测定 | 第68页 |
| ·生物量的测定 | 第68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-77页 |
| ·CgGPD、GPD1 和GPD2 基因编码蛋白序列及生物信息学比较 | 第68-69页 |
| ·重组载体YEplac-GPD1 和YEplac-GPD2 酵母表达载的构建 | 第69-70页 |
| ·CgGPD 基因在渗透压敏感突变株h091 和p652 中表达 | 第70-72页 |
| ·比较分析过量表达CgGPD、GPD1 和GPD2 基因对突变株生长的影响. | 第72-73页 |
| ·CgGPD、GPD1 和GPD2 基因表达对突变株在渗透压胁迫下甘油合成能力的影响 | 第73-75页 |
| ·厌氧培养条件下CgGPD、GPD1 和GPD2 基因表达对突变株的影响 | 第75-77页 |
| ·本章小结 | 第77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 第五章 产甘油假丝酵母整合电击遗传转化 | 第81-93页 |
| ·引言 | 第81页 |
| ·材料与方法 | 第81-84页 |
| ·菌株、质粒以及培养条件 | 第81-82页 |
| ·试剂 | 第82页 |
| ·主要仪器 | 第82页 |
| ·分子生物学常规操作 | 第82-83页 |
| ·整合载体的构建 | 第83页 |
| ·产甘油假丝酵母的电击转化 | 第83-84页 |
| ·醋酸锂转化 | 第84页 |
| ·转化子的验证 | 第84页 |
| ·结果 | 第84-89页 |
| ·C. glycerinogenes 对腐草霉素（Zeocin）抗生素的敏感性 | 第84-85页 |
| ·整合载体的构建 | 第85页 |
| ·电场强度对转化效率的影响 | 第85-86页 |
| ·DTT 和/或LiAc 预处理细胞提高C. glycerinogenes 转化效率 | 第86页 |
| ·细胞的生长状态对转化效率的影响 | 第86-87页 |
| ·细胞浓度和质粒量对转化效率的影响 | 第87-88页 |
| ·电击后的细胞处理对转化效率的影响 | 第88-89页 |
| ·转化子的验证 | 第89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| ·本章小结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 第六章 CgGPD 基因过表达或缺失对产甘油假丝酵母甘油合成能力的影响 | 第93-109页 |
| ·引言 | 第93页 |
| ·材料与方法 | 第93-97页 |
| ·菌株、质粒及其培养条件 | 第93-94页 |
| ·试剂 | 第94页 |
| ·主要仪器 | 第94页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第94页 |
| ·转化子质粒DNA 的小量提取 | 第94页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第94页 |
| ·CgGPD 基因敲除载体和过表达载体的构建 | 第94-95页 |
| ·产甘油假丝酵母的电击转化 | 第95-96页 |
| ·细胞粗提液的制备和酶活的测定 | 第96页 |
| ·分析方法 | 第96-97页 |
| ·结果与讨论 | 第97-106页 |
| ·CgGPD 基因敲除载体pUC-gpd-Zeocin 的构建 | 第97页 |
| ·CgGPD 基因过表达载体pGA-rDNA-CgGPD 的构建 | 第97-98页 |
| ·产甘油假丝酵母CgGPD 基因中断突变株和过表达转化子的鉴定及遗传稳定性 | 第98-100页 |
| ·CgGPD 基因中断或过量表达对细胞生长的影响 | 第100-101页 |
| ·CgGPD 基因中断或过量表达对葡萄糖消耗的影响 | 第101-102页 |
| ·CgGPD 基因中断或过量表达对细胞甘油合成能力的影响 | 第102-103页 |
| ·CgGPD 基因中断或过量表达对相关代谢副产物的影响 | 第103-104页 |
| ·CgGPD 基因中断或过量表达转化子在发酵过程中GPD 酶活的变化 | 第104-106页 |
| ·本章小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-109页 |
| 主要结论 | 第109-111页 |
| 论文创新点 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第113页 |
