| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 植物的抗病性 | 第11-15页 |
| ·植物基因对基因的抗病性 | 第11-13页 |
| ·病原物Avr基因 | 第11-12页 |
| ·植物R基因 | 第12-13页 |
| ·植物R基因产物对病原物Avr基因产物的识别 | 第13页 |
| ·植物非寄主抗性 | 第13-15页 |
| ·寄主抗性和非寄主抗性的相似性 | 第14页 |
| ·非寄主抗性的研究进展 | 第14-15页 |
| 2 基因表达抑制研究技术及其在抗病性中的应用 | 第15-21页 |
| ·病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术 | 第15-21页 |
| ·VIGS作用机理 | 第16-17页 |
| ·VIGS载体 | 第17-18页 |
| ·影响VIGS沉默效率的主要因子 | 第18-19页 |
| ·VIGS的在植物基因功能鉴定中的应用现状 | 第19-21页 |
| ·RNA1作用机制 | 第21页 |
| 3 泛素延伸蛋白基因功能的研究现状 | 第21-24页 |
| ·泛素的结构组成和进化 | 第21-23页 |
| ·泛素的功能 | 第23-24页 |
| 4、本研究的目的与内容 | 第24-25页 |
| 第二部分 实验内容和结果 | 第25-59页 |
| 1 材料和方法 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| ·载体构建 | 第27-29页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增产物与T-vector的连接 | 第28页 |
| ·RNAi载体构建 | 第28-29页 |
| ·超表达载体的构建 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态的大量制备 | 第29页 |
| ·热击法转化大肠杆菌质粒 | 第29-30页 |
| ·碱法抽提质粒 | 第30页 |
| ·阳性克隆检验 | 第30-31页 |
| ·酶切检验 | 第30页 |
| ·PCR检验 | 第30-31页 |
| ·农杆菌(GV1301)感受态细胞制备及电击转化 | 第31-32页 |
| ·农杆菌(GV1301)感受态细胞制备 | 第31页 |
| ·电转化 | 第31-32页 |
| ·农杆菌接种 | 第32页 |
| ·HR检验以及黑胫病菌、菌核病菌接种检验 | 第32-33页 |
| ·Cf-4/Avr4介导的HR检验 | 第33页 |
| ·黑胫病菌、菌核病菌接种检验 | 第33页 |
| ·植物总RNA提取和电泳 | 第33-34页 |
| ·器皿和容器处理 | 第33页 |
| ·RNA的提取 | 第33页 |
| ·甲醛变性电泳 | 第33-34页 |
| ·反转录获取cDNA | 第34页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第34-35页 |
| ·UBI、RLP和UEP RNAI和超表达处理叶片抗盐性生物测定 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-59页 |
| ·本氏烟UEP基因的克隆和序列分析 | 第35页 |
| ·病害抗性诱导剂处理以及病原物接种对本氏烟UEP基因表达的影响 | 第35-36页 |
| ·病害抗性诱导剂处理对本氏烟UEP基因表达的影响 | 第36页 |
| ·病原物接种处理对本氏烟UEP基因表达的影响 | 第36页 |
| ·NBUEP基因及其NBUBI和NBRLP部分序列的VIGS沉默处理对本氏烟生长发育、坏死和抗病性的影响 | 第36-38页 |
| ·NbUEP及其NbUBI和NbRLP部分目标基因沉默结构的构建 | 第37页 |
| ·NbUEP及其NbUBI和NbRLP部分基因沉默处理后的植株表型 | 第37页 |
| ·NbRLP的VIGS沉默处理对Avr4/Cf-4介导的过敏性坏死反应的影响 | 第37-38页 |
| ·NBUEP基因及其NBUBI和NBRLP部分序列的RNAI和超表达处理对植物细胞坏死的影响 | 第38-41页 |
| ·NbUEP基因及其NbUBI和NbRLP部分序列RNAi结构的构建 | 第38-39页 |
| ·NbUEP基因及其NbUBI和NbRLP部分基因超表达结构的构建 | 第39页 |
| ·NbUEP基因及其NbUBI和NbRLP部分序列的瞬时RNAi和超表达处理对本氏烟植株细胞坏死的影响 | 第39-40页 |
| ·NbUEP基因及其NbUBI和NbRLP部分序列的瞬时RNAi和超表达处理后本氏烟植株内相应内源基因转录本积累情况的RT-PCR分析 | 第40-41页 |
| ·NBUEP基因及其NBUBI和NBRLP部分序列的超表达对植物抗性的影响 | 第41-42页 |
| ·NbUEP基因及其NbUBI和NbRLP部分序列的超表达对植物防卫相关基因Hin1表达的影响 | 第41页 |
| ·NbUEP基因及其NbUBI和NbRLP部分序列的超表达对本氏烟抗病性的影响 | 第41-42页 |
| ·NBUEP基因及其NBUBI和NBRLP部分序列的超表达对植物耐盐性的影响 | 第42-59页 |
| 第三部分 小结与讨论 | 第59-64页 |
| 1 小结 | 第59-60页 |
| 2 讨论 | 第60-64页 |
| ·NBUEP基因对植物细胞坏死、抗病性和抗逆性等生物学功能的调控作用及其调控机理 | 第60-62页 |
| ·RNAI载体中的插入序列对RNA1分析的影响 | 第62页 |
| ·后续研究 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
