| 提要 | 第1-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-25页 |
| ·抗体与肿瘤治疗 | 第9-18页 |
| ·单克隆抗体与肿瘤治疗 | 第9-11页 |
| ·单链抗体与肿瘤治疗 | 第11-18页 |
| ·单链抗体的生物学特性和制备技术 | 第11-13页 |
| ·单链抗体的生物学特性 | 第11-12页 |
| ·单链抗体的制备 | 第12-13页 |
| ·单链抗体的修饰 | 第13-16页 |
| ·单链抗体在肿瘤治疗中的应用 | 第16-18页 |
| ·细胞周期与肿瘤 | 第18-23页 |
| ·细胞周期 | 第18-19页 |
| ·细胞周期与肿瘤 | 第19-20页 |
| ·cyclin D1与肿瘤 | 第20-23页 |
| ·cyclin D1蛋白的生物学特点 | 第20页 |
| ·细胞中cyclin D1蛋白浓度的调节 | 第20-21页 |
| ·cyclin D1蛋白的作用机制 | 第21-22页 |
| ·cyclin Dl蛋白与肿瘤的关系 | 第22页 |
| ·cyclin Dl与肿瘤治疗 | 第22-23页 |
| ·本研究的立题依据和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第25-45页 |
| ·实验材料 | 第25-32页 |
| ·抗cyclin D1 单链抗体、菌株及细胞株 | 第25页 |
| ·主要试剂，缓冲液及培养基 | 第25-32页 |
| ·主要试剂及材料 | 第25-27页 |
| ·各种溶液配制 | 第27-32页 |
| ·实验仪器 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·pDF-AD9 重组原核表达载体构建 | 第33-39页 |
| ·目的基因片段的获得 | 第34-36页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第34页 |
| ·PCR 产物回收 | 第34-35页 |
| ·目的片段的酶切与回收 | 第35-36页 |
| ·载体片段的获得 | 第36页 |
| ·载体与目的片段的连接 | 第36页 |
| ·XL1-Blue 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第37页 |
| ·重组原核表达载体的鉴定 | 第37-39页 |
| ·提取和纯化重组质粒（碱裂解法小量提取质粒） | 第38页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·DNA测序 | 第39页 |
| ·抗cyclin D1 单链抗体(AD9)基因表达分析 | 第39-40页 |
| ·原核表达体系的建立 | 第39页 |
| ·AD9 基因的原核表达分析 | 第39页 |
| ·AD9 的抗原结合活性鉴定（ELISA 实验） | 第39-40页 |
| ·AD9 的可溶性表达、纯化及鉴定 | 第40-41页 |
| ·AD9 活性分析 | 第41-43页 |
| ·ELISA 实验检测纯化的AD9 与cyclin D1 的结合活性 | 第41页 |
| ·Western blot 分析检测纯化的AD9 与cyclin D1 的结合活性 | 第41页 |
| ·ELISA 法检测AD9 与抗cyclin D1 多克隆抗体竞争性结合实验 | 第41-42页 |
| ·AD9 亲和力的测定 | 第42页 |
| ·AD9 与肿瘤细胞内cyclin D1 蛋白的相互作用分析 | 第42-43页 |
| ·HeLa 与MCF-7 细胞的培养 | 第42页 |
| ·HeLa 与MCF-7 细胞爬片的制备 | 第42-43页 |
| ·免疫荧光染色实验 | 第43页 |
| ·免疫共沉淀检测肿瘤细胞内表达的AD9 与cyclin D1 的结合 | 第43-45页 |
| ·脂质体介导的瞬时转染 | 第43-44页 |
| ·免疫共沉淀 | 第44-45页 |
| 第三章 实验结果 | 第45-57页 |
| ·pDF-AD9重组原核表达载体的构建 | 第45页 |
| ·抗cyclin D1 单链抗体( AD9)基因表达分析 | 第45-46页 |
| ·pDF-AD9/ H82151 诱导上清结合cyclin D1 活性分析 | 第45-46页 |
| ·AD9 的可溶性表达、纯化及鉴定 | 第46-47页 |
| ·AD9 活性鉴定 | 第47-50页 |
| ·ELISA 检测纯化的AD9 与cyclin D1 结合活性 | 第47页 |
| ·Western blot 检测纯化的AD9 与cyclin D1 结合活性 | 第47页 |
| ·AD9 对抗cyclin D1 多克隆抗体具有竞争性抑制活性 | 第47-48页 |
| ·AD9 的亲和力测定 | 第48-49页 |
| ·AD9 与肿瘤细胞内cyclin D1 蛋白的相互作用 | 第49-50页 |
| ·免疫共沉淀 | 第50-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-60页 |
| ·抗cyclin D1 人源单链抗体的表达系统的选择 | 第57-58页 |
| ·抗cyclin D1 人源单链抗体的纯化策略 | 第58-59页 |
| ·蛋白与蛋白之间相互作用分析——免疫共沉淀实验 | 第59-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 中文摘要 | 第69-71页 |
| Abstract | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
