猪伪狂犬病病毒Fa株糖蛋白gD基因的分子克隆、原核表达及核酸疫苗免疫效力研究
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1 伪狂犬病病毒研究进展 | 第12-20页 |
| ·猪伪狂犬病流行特点 | 第12页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第12-13页 |
| ·发病机理 | 第13页 |
| ·宿主抗PRV感染的几种免疫保护策略 | 第13-15页 |
| ·PRV病毒逃逸宿主机体免疫系统的几种策略 | 第15-16页 |
| ·病毒分子生物学 | 第16-19页 |
| ·PRV新型疫苗研究进展 | 第19-20页 |
| 2 核酸疫苗研究进展 | 第20-24页 |
| ·核酸疫苗发现 | 第21页 |
| ·核酸疫苗免疫应答 | 第21-22页 |
| ·核酸疫苗做为治疗性疫苗的的前景 | 第22-23页 |
| ·免疫佐剂的研究 | 第23-24页 |
| ·注射途径及方法 | 第24页 |
| ·核酸疫苗的构建 | 第24页 |
| 3 gD基因与免疫学意义 | 第24-27页 |
| 第二章 猪伪狂犬病毒gD基因的分子克隆与序列分析 | 第27-37页 |
| 1 材料与方法 | 第27-33页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·毒株、细胞、菌株及试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·主要溶液配制 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·PRV的增殖 | 第28页 |
| ·PRV病毒DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·特异性引物设计 | 第29页 |
| ·聚合酶链反应(PCR)扩增gD基因 | 第29页 |
| ·扩增产物电泳鉴定 | 第29-30页 |
| ·目的片段克隆载体构建 | 第30-31页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第31页 |
| ·转化菌落的鉴定 | 第31-32页 |
| ·核苷酸序列的测定及分析 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-37页 |
| ·PCR扩增目的基因电泳鉴定 | 第33页 |
| ·重组克隆质粒pMD-gD酶切鉴定 | 第33页 |
| ·序列测定结果分析 | 第33-37页 |
| ·序列测定 | 第33-34页 |
| ·核苷酸序列同源性比较 | 第34页 |
| ·推导氨基酸同源性比较 | 第34-37页 |
| 第三章 PRV-gD基因原核表达和活性检测 | 第37-49页 |
| 1 材料与方法 | 第37-43页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·质粒、菌株及主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·主要溶液的配制 | 第37-39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·原核表达引物设计 | 第39页 |
| ·PRV gD基因去信号肽亚克隆 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增产物电泳鉴定 | 第40页 |
| ·目的片段的回收连接转化 | 第40页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第40页 |
| ·测序验证 | 第40页 |
| ·原核表达载体构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒转化 | 第41页 |
| ·重组质粒pET-gD-n的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·重组表达菌株的培养及表达 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第42页 |
| ·表达产物的免疫印迹 | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-46页 |
| ·gD基因去信号肽(gD-n)的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·重组克隆质粒pMD-gD-n的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·去信号肽gD基因序列测定结果 | 第44-45页 |
| ·重组原核表达载体pET-gD-n的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE分析gD基因去信号肽的蛋白表达 | 第45-46页 |
| ·Western blot分析 | 第46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 真核表达载体构建及免疫效力研究 | 第49-61页 |
| 1 材料和方法 | 第49-54页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·主要溶液配制 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-54页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·转化及鉴定 | 第51页 |
| ·免疫效力研究 | 第51-54页 |
| 2 结果 | 第54-58页 |
| ·真核表达载体pcD-gD、pCI-gD酶切鉴定 | 第54页 |
| ·ELISA检测特异性抗体 | 第54-55页 |
| ·中和抗体分析 | 第55-56页 |
| ·T淋巴细胞亚类数量测定 | 第56-57页 |
| ·攻毒保护实验 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| ·载体的选择 | 第58页 |
| ·基因疫苗质粒的纯化 | 第58页 |
| ·免疫接种途径的选择 | 第58-59页 |
| ·核酸疫苗诱导机体体液免疫反应 | 第59页 |
| ·T淋巴细胞水平与机体免疫状况 | 第59-60页 |
| ·攻毒后的保护情况 | 第60页 |
| ·IL-15表达质粒对核酸疫苗增强作用 | 第60-61页 |
| 全文总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附图 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第74页 |
