猪轮状病毒NSP4基因原核与真核表达载体的构建及其表达研究
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-21页 |
| 1.轮状病毒病概述 | 第9-10页 |
| 2.轮状病毒概述 | 第10-13页 |
| 3.轮状病毒疫苗研究 | 第13-15页 |
| ·传统疫苗 | 第13-14页 |
| ·亚单位疫苗 | 第14页 |
| ·DNA疫苗 | 第14-15页 |
| ·猪轮状病毒疫苗研究 | 第15页 |
| 4.轮状病毒的检测 | 第15-16页 |
| 5.轮状病毒蛋白的研究 | 第16-20页 |
| ·结构蛋白 | 第16-17页 |
| ·非结构蛋白 | 第17-20页 |
| 6.目的意义 | 第20-21页 |
| 1.材料 | 第21-22页 |
| ·生物材料 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.方法 | 第22-33页 |
| ·NSP4基因的克隆及鉴定 | 第22-26页 |
| ·PRV病毒的增殖 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·NSP4基因的扩增及回收 | 第22-23页 |
| ·NSP4的克隆及鉴定 | 第23-26页 |
| ·NSP4基因原核表达载体的构建及其表达研究 | 第26-30页 |
| ·NSP4c的克隆与鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒pet32a-NSP4c的构建及其鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒pet32a-NSP4c的诱导表达 | 第27-29页 |
| ·NSP4c蛋白的纯化 | 第29页 |
| ·间接ELISA的构建 | 第29-30页 |
| ·NSP4基因真核表达载体的构建及其表达研究 | 第30-33页 |
| ·目的基因的酶切及纯化 | 第30页 |
| ·连接与转化 | 第30页 |
| ·重组阳性转化子的鉴定 | 第30页 |
| ·NSP4基因在COS7细胞中的表达 | 第30-31页 |
| ·pEGFP-N1-NSP4质粒的大量制备与提纯 | 第31-32页 |
| ·pEGFP-N1-NSP4免疫抗体检测 | 第32-33页 |
| 3.实验结果 | 第33-42页 |
| ·NSP4基因的克隆及鉴定 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR结果 | 第33页 |
| ·重组质粒pMD-19T-NSP4的鉴定 | 第33-34页 |
| ·NSP4基因序列测定与分析 | 第34页 |
| ·NSP4c基因原核表达载体的构建及其表达研究 | 第34-39页 |
| ·NSP4c PCR结果 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pMD-19T-NSP4c的鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pet32a-NSP4c的鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒pet32a-NSP4c的诱导表达 | 第36-38页 |
| ·NSP4c融合蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·NSP4基因真核表达载体的构建及其表达研究 | 第39-42页 |
| ·重组质粒pEGFP-N1-NSP4的鉴定 | 第39-40页 |
| ·NSP4基因在COS7细胞中的表达鉴定 | 第40-41页 |
| ·pEGFP-N1-NSP4免疫抗体检测 | 第41-42页 |
| 4.讨论 | 第42-47页 |
| ·NSP4基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·NSP4基因的RT-PCR | 第42-43页 |
| ·NSP4基因的克隆及序列分析 | 第43页 |
| ·NSP4c基因的原核表达 | 第43-44页 |
| ·NSP4基因的真核表达 | 第44-47页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·pEGFP-N1-NSP4免疫原性分析 | 第46-47页 |
| 5.结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 实验试剂的配置 | 第54页 |
