猪伪狂犬病病毒gC基因的克隆及生物信息学分析
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 文献综述 | 第9-29页 |
| 一、猪伪狂犬病的概况 | 第9-21页 |
| 1 流行病学 | 第9-10页 |
| 2 病原 | 第10-16页 |
| ·伪狂犬病病毒的主要理化和生物学特性 | 第10-11页 |
| ·伪狂犬病病毒的分子生物学特性 | 第11-16页 |
| ·伪狂犬病病毒的基因组 | 第11-12页 |
| ·伪狂犬病病毒的蛋白及其功能 | 第12-16页 |
| 3 临床症状 | 第16页 |
| 4 病理变化 | 第16-17页 |
| 5 诊断 | 第17-21页 |
| ·血清学诊断技术 | 第17-19页 |
| ·分子生物学诊断技术 | 第19-21页 |
| ·核酸探针诊断技术 | 第19页 |
| ·PCR技术 | 第19-21页 |
| 6 防制 | 第21页 |
| 二、gC基因概况 | 第21-28页 |
| 1 gC基因的功能 | 第22-23页 |
| ·病毒吸附方面 | 第22页 |
| ·影响病毒的释放和病毒粒子的稳定性 | 第22-23页 |
| ·影响毒力 | 第23页 |
| 2 gC的免疫学意义 | 第23页 |
| 3 相关PRV新型疫苗研究 | 第23-24页 |
| 4 生物信息学在病毒研究中的作用 | 第24-28页 |
| ·通过多重序列对齐搜寻保守序列 | 第25-26页 |
| ·通过数量关系的优化推导敏感位点 | 第26-27页 |
| ·通过同源建模预测序列的高级结构 | 第27-28页 |
| 三、实验目的和意义 | 第28-29页 |
| 材料与方法 | 第29-37页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·细胞、毒株、载体和菌株 | 第29页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-37页 |
| ·病毒基因组DNA的抽提 | 第30-31页 |
| ·PRV病毒的细胞增殖 | 第30-31页 |
| ·病毒基因组DNA的抽提 | 第31页 |
| ·PRV-gC基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·引物的设计与合成 | 第31页 |
| ·gC基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·PRV-gC基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·PCR产物目的DNA片段的回收 | 第32页 |
| ·质粒载体的准备 | 第32页 |
| ·连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的转化 | 第33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| ·菌落PCR法鉴定 | 第33页 |
| ·酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·gC基因的序列测定 | 第34页 |
| ·gC基因的序列分析 | 第34-37页 |
| ·PRV-gC基因序列的汇总 | 第34页 |
| ·PRV-gC基因核苷酸序列分析 | 第34-35页 |
| ·PRV-gC基因氨基酸序列分析 | 第35-37页 |
| 结果 | 第37-52页 |
| 1 PRV-gC基因的PCR扩增 | 第37页 |
| 2 PRV-gC基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·重组质粒菌落PCR法鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第38页 |
| 3 序列测定 | 第38-39页 |
| 4 序列分析 | 第39-52页 |
| ·PRV-gC基因序列汇总 | 第39-40页 |
| ·PRV-gC基因核苷酸序列分析 | 第40-45页 |
| ·PRV-gC基因核苷酸序列同源性分析 | 第40页 |
| ·PRV-gC基因核苷酸高变缺失序列分析 | 第40-41页 |
| ·PRV-gC基因核苷酸序列遗传进化树分析 | 第41-42页 |
| ·PRV-gC基因核苷酸序列酶切位点分析 | 第42-43页 |
| ·PRV-gC基因核苷酸序列密码子偏爱性分析 | 第43-45页 |
| ·PRV-gC基因氨基酸序列分析 | 第45-52页 |
| ·PRV-gC基因氨基酸序列同源性分析 | 第45页 |
| ·PRV-gC蛋白抗原性预测分析 | 第45-50页 |
| ·PRV-gC蛋白高级结构预测 | 第50-52页 |
| 讨论 | 第52-56页 |
| 1 关于伪狂犬病病毒gC基因的克隆 | 第52页 |
| 2 关于PRV-gC基因的核苷酸序列分析 | 第52-53页 |
| 3 关于gC基因变异与抗原性的关系 | 第53-54页 |
| 4 关于PRV-gC蛋白高级结构的预测和分析 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64页 |