| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-34页 |
| ·1，3-丙二醇及其生产方法 | 第12-13页 |
| ·1，3-丙二醇的性质 | 第12页 |
| ·1，3-丙二醇的用途 | 第12-13页 |
| ·1，3-丙二醇的生产方法及市场状况 | 第13页 |
| ·微生物发酵法生产1，3-丙二醇及研究现状 | 第13-19页 |
| ·以甘油为底物产1，3-丙二醇 | 第14-16页 |
| ·1，3-丙二醇生产菌株发酵条件及方式的研究 | 第16-19页 |
| ·葡萄糖为底物发酵转化1，3-丙二醇 | 第19页 |
| ·产1，3-丙二醇基因工程菌的研究进展 | 第19-22页 |
| ·立题目的与意义 | 第22-23页 |
| ·研究内容 | 第23-24页 |
| ·本论文研究框架 | 第24页 |
| 参考文献 | 第24-34页 |
| 第二章 克雷伯氏菌K.pneumoniae新型表达系统的构建 | 第34-46页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·材料与方法 | 第35-38页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·克雷伯氏菌染色体的提取 | 第36页 |
| ·PCR引物及基因扩增 | 第36页 |
| ·感受态细胞制备与转化实验 | 第36-37页 |
| ·克雷伯氏菌阳性转化子的鉴定 | 第37页 |
| ·质粒DNA的提取与验证 | 第37页 |
| ·Pkan启动子在克雷伯氏菌中转录活性的初步测定 | 第37页 |
| ·重组克雷伯氏菌(K.pneumoniae/pETPkan-dhaT)发酵实验 | 第37页 |
| ·中间产物3-羟基丙醛检测 | 第37页 |
| ·1，3-丙二醇氧化还原酶酶活测定 | 第37页 |
| ·甘油及1，3-丙二醇含量的测定 | 第37页 |
| ·质粒pET28a在克雷伯氏菌中遗传稳定性分析 | 第37-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-43页 |
| ·质粒pET28a在K pneumoniae中的遗传稳定性 | 第38页 |
| ·重组质粒pETPkan的构建 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pETPkan-cat的构建 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pETPkan-dhaT的构建 | 第40-41页 |
| ·重组菌K pneumoniae/pETPkan-dhaT质粒稳定性分析 | 第41-42页 |
| ·重组菌K pneumoniae/pETPkan-dhaT发酵特性 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 第三章 重组克雷伯氏菌K.pneumoniae/pETPkan-dhaT初步发酵条件优化的研究 | 第46-60页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·材料与方法 | 第46-47页 |
| ·菌株 | 第46-47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·仪器 | 第47页 |
| ·培养基和培养条件 | 第47页 |
| ·甘油及1，3-丙二醇含量的测定 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-57页 |
| ·甘油浓度对重组菌发酵及生长的影响 | 第47-48页 |
| ·有机氮源对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第48-49页 |
| ·无机氮源对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第49页 |
| ·无机盐对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第49-50页 |
| ·酵母膏浓度对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第50页 |
| ·(NH_4)_2SO_4浓度对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第50-51页 |
| ·柠檬酸浓度对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第51页 |
| ·正交试验 | 第51-53页 |
| ·初始pH对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第53页 |
| ·初始培养温度对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第53页 |
| ·装液量对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第53-54页 |
| ·接种量对重组菌甘油转化率及生长的影响 | 第54页 |
| ·重组菌在最适培养基和环境条件下摇瓶初步发酵实验 | 第54-55页 |
| ·7L发酵罐重组菌分批发酵初步实验 | 第55-56页 |
| ·搅拌转速对重组菌分批发酵的影响 | 第56-57页 |
| ·7L发酵罐重组菌补料分批发酵实验 | 第57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 第四章 以粗甘油为底物重组克雷伯氏菌发酵产1，3-丙二醇的研究 | 第60-70页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·材料与方法 | 第60-61页 |
| ·菌株 | 第60页 |
| ·培养基与培养条件 | 第60-61页 |
| ·试剂与仪器 | 第61页 |
| ·检测方法 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-66页 |
| ·产甘油假丝酵母发酵法合成甘油 | 第61-62页 |
| ·以产甘油假丝酵母发酵液为原料，重组菌发酵产1，3-丙二醇初步研究 | 第62-65页 |
| ·以工业级甘油为底物，重组菌发酵产1，3-丙二醇初步研究 | 第65-66页 |
| ·以工业级甘油为底物，重组菌7L发酵罐上补料分批发酵实验 | 第66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 第五章 Dha操纵子在大肠杆菌和酿酒酵母中的表达 | 第70-82页 |
| ·引言 | 第70-71页 |
| ·材料与方法 | 第71-73页 |
| ·菌株与质粒 | 第71页 |
| ·试剂 | 第71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71页 |
| ·PCR引物及扩增 | 第71-72页 |
| ·感受态细胞制备与转化实验 | 第72页 |
| ·质粒的提取与验证 | 第72页 |
| ·重组大肠杆菌JM109-dha发酵实验 | 第72页 |
| ·酿酒酵母阳性转化子的挑选 | 第72-73页 |
| ·重组酿酒酵母质粒稳定性分析 | 第73页 |
| ·酿酒酵母基因工程菌的初步发酵实验 | 第73页 |
| ·甘油脱水酶酶活测定 | 第73页 |
| ·1，3-丙二醇氧化还原酶酶活测定 | 第73页 |
| ·葡萄糖和1，3-丙二醇含量的测定 | 第73页 |
| ·结果与讨论 | 第73-79页 |
| ·重组大肠杆菌的构建与初步发酵实验 | 第73-74页 |
| ·Dha操纵子在酿酒酵母S.cerevisiae W303-1A中的表达 | 第74-75页 |
| ·重组质粒pZ-BT的构建 | 第75-78页 |
| ·酿酒酵母基因工程菌W303-BT的遗传稳定性 | 第78页 |
| ·重组酿酒酵母W303-BT特性的初步研究 | 第78-79页 |
| ·本章小结 | 第79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 第六章 以葡萄糖为底物产1，3-丙二醇产甘油假丝酵母基因工程菌的构建 | 第82-98页 |
| ·引言 | 第82-83页 |
| ·材料与方法 | 第83-86页 |
| ·菌株与质粒 | 第83页 |
| ·试剂 | 第83-84页 |
| ·主要仪器 | 第84页 |
| ·培养基 | 第84页 |
| ·染色体的提取 | 第84页 |
| ·PCR引物及扩增 | 第84-85页 |
| ·感受态细胞制备与转化实验 | 第85页 |
| ·质粒的提取与验证 | 第85页 |
| ·根癌农杆菌介导转化产甘油假丝酵母 | 第85页 |
| ·产甘油假丝酵母阳性转化子的表型验证 | 第85页 |
| ·Southern Blot | 第85-86页 |
| ·产甘油假丝酵母基因工程菌遗传稳定性分析 | 第86页 |
| ·产甘油假丝酵母基因工程菌的发酵初步实验 | 第86页 |
| ·甘油脱水酶酶活测定 | 第86页 |
| ·1，3-丙二醇氧化还原酶酶活测定 | 第86页 |
| ·葡萄糖、甘油和1，3-丙二醇含量的测定 | 第86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-95页 |
| ·重组质粒pGAP4的构建 | 第86-90页 |
| ·重组质粒pGPD4的构建 | 第90-92页 |
| ·产甘油假丝酵母基因工程菌WL2002-GAP和WL2002-GPD的构建 | 第92-93页 |
| ·基因工程菌WL2002-GAP和WL2002-GPD的遗传稳定性 | 第93-94页 |
| ·基因工程菌WL2002-GAP和WL2002-GPD特性初步研究 | 第94页 |
| ·在盐压胁迫条件下，基因工程菌WL2002-GPD的初步发酵实验 | 第94-95页 |
| ·本章小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-98页 |
| 主要结论与展望 | 第98-102页 |
| 主要结论 | 第98-100页 |
| 展望 | 第100-102页 |
| 论文创新点 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 附录:作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第106页 |
