| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第12-20页 |
| 1.SELEX技术的基本原理 | 第12-13页 |
| 2.脱氧核酶及其功能 | 第13页 |
| 3.两种普适性的脱氧核酶及其应用 | 第13-15页 |
| 4.本课题的研究目标和内容 | 第15-16页 |
| 参考文献 | 第16-20页 |
| 第二章 催化RNA切割反应的脱氧核酶的体外筛选 | 第20-31页 |
| 1.引言 | 第20页 |
| 2.实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1 核酸,蛋白酶和感受态细胞 | 第20-21页 |
| 2.2 实验试剂及耗材 | 第21页 |
| 2.3 实验仪器 | 第21页 |
| 3.实验方法 | 第21-24页 |
| 3.1 催化RNA切割反应的脱氧核酶的体外筛选方案 | 第21-23页 |
| 3.2 10-12opt切割产物的鉴定 | 第23-24页 |
| 4.结果与讨论 | 第24-30页 |
| 4.1 催化RNA切割反应的脱氧核酶的体外筛选流程 | 第24-25页 |
| 4.2 活性脱氧核酶的挑选,命名及其底物切割位点的鉴定 | 第25-26页 |
| 4.3 对10-12结合臂的初步优化 | 第26-27页 |
| 4.4 对10-12催化环的优化 | 第27-28页 |
| 4.5 10-12opt与8-17同源性分析 | 第28-29页 |
| 4.6 利用质谱对10-12opt的切割产物进行分析 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-31页 |
| 第三章 10-12OPT的生物化学参数表征 | 第31-54页 |
| 1.引言 | 第31-32页 |
| 2.实验材料 | 第32页 |
| 2.1 核酸,蛋白酶 | 第32页 |
| 2.2 实验试剂及耗材 | 第32页 |
| 2.3 实验仪器 | 第32页 |
| 3.实验方法 | 第32-39页 |
| 3.1 10-12opt保守碱基及非经典碱基对上的基团保守性分析 | 第32-33页 |
| 3.2 10-12opt对底物切割位点选择性分析 | 第33页 |
| 3.3 FRET分析镁离子诱导的10-12opt与底物复合物的空间折叠 | 第33-34页 |
| 3.4 10-12opt对二价金属离子的依赖性及pH依赖性分析 | 第34页 |
| 3.5 10-12opt的动力学测定 | 第34-39页 |
| 4.结果与讨论 | 第39-53页 |
| 4.1 10-12opt左侧结合臂及催化环的保守碱基分析 | 第39-40页 |
| 4.2 10-12opt左侧结合臂非经典碱基对的深入研究 | 第40-43页 |
| 4.3 10-12opt对底物切割位点的碱基选择性分析 | 第43-44页 |
| 4.4 10-12opt 7号位T与切割位点碱基相互作用分析 | 第44-45页 |
| 4.5 10-12opt的结合臂长度对催化活性的影响 | 第45-47页 |
| 4.6 缩短的10-12opt左侧结合臂上非经典碱基对特异性分析 | 第47-48页 |
| 4.7 荧光共振能量转移分析镁离子诱导的10-12opt与底物的构象 | 第48-50页 |
| 4.8 10-12opt的金属离子依赖性分析 | 第50-51页 |
| 4.9 10-12opt的pH依赖性分析 | 第51-52页 |
| 4.10 10-12opt的酶切反应动力学分析 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-54页 |
| 第四章 10-12OPT在切割MICRORNA及ATP传感器中的应用 | 第54-60页 |
| 1.引言 | 第54页 |
| 2.实验材料 | 第54-55页 |
| 2.1 核酸 | 第54-55页 |
| 2.2 实验试剂及耗材 | 第55页 |
| 2.3 实验仪器 | 第55页 |
| 3.实验方法 | 第55-56页 |
| 3.1 10-12opt对不同切割位点的microRNA序列的体外剪切 | 第55页 |
| 3.2 10-12opt参与构建的ATP传感器对靶标的特异性检测 | 第55-56页 |
| 4.结果与讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 10-12opt能切割位点不同的microRNA序列 | 第56-57页 |
| 4.2 10-12opt参与构建的ATP传感器能对ATP分子实现特异性检测 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-62页 |
| 讨论 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
