| 摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 1 引言 | 第15-27页 |
| 1.1 黑曲霉的概述 | 第15-21页 |
| 1.1.1 黑曲霉表达系统的研究概况 | 第15-21页 |
| 1.2 淀粉酶系的调控研究 | 第21-22页 |
| 1.3 启动子的调控研究 | 第22-25页 |
| 1.3.1 启动子的分类 | 第22-23页 |
| 1.3.2 启动子的分析方法 | 第23-24页 |
| 1.3.3 糖化酶启动子的研究情况 | 第24-25页 |
| 1.4 目的意义 | 第25-26页 |
| 1.5 技术路线 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.2 酶与生化试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 常用试剂的配置 | 第28-29页 |
| 2.1.4 培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.2.1 黑曲霉基因组DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.2 基因克隆 | 第30-34页 |
| 2.2.3 根癌农杆菌介导的黑曲霉的遗传转化 | 第34-35页 |
| 2.2.4 重组菌株的酶活测定 | 第35-36页 |
| 2.2.5 重组菌株的分泌蛋白质组分析 | 第36页 |
| 2.2.6 重组菌株的荧光定量分析 | 第36页 |
| 2.2.7 重组菌株的RNA-seq转录组测序分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-94页 |
| 3.1 黑曲霉表达系统的分泌蛋白质组分析 | 第37-39页 |
| 3.2 敲除淀粉水解酶系正调控因子AmyR的研究 | 第39-55页 |
| 3.2.1 正调控因子AmyR缺失菌株的构建 | 第40-47页 |
| 3.2.2 AmyR缺失菌株的检测 | 第47-48页 |
| 3.2.3 AmyR缺失菌株的蛋白质组分析 | 第48页 |
| 3.2.4 AmyR缺失菌株的转录组分析 | 第48-53页 |
| 3.2.5 AmyR缺失菌株的蛋白酶活性分析 | 第53-54页 |
| 3.2.6 AmyR缺失菌株的生长状态观察 | 第54-55页 |
| 3.3 碳代谢抑制因子CreA的调控研究 | 第55-77页 |
| 3.3.1 CreA超表达菌株的构建 | 第55-65页 |
| 3.3.2 CreA超表达菌株的检测 | 第65-66页 |
| 3.3.3 CreA超表达菌株的转录组测序分析 | 第66-69页 |
| 3.3.4 CreA超表达菌株的生长状态观察 | 第69-70页 |
| 3.3.5 CreA敲除菌株的构建 | 第70-76页 |
| 3.3.6 CreA敲除菌株的检测 | 第76-77页 |
| 3.4 提高glaA启动子转录效率的研究 | 第77-94页 |
| 3.4.1 重复型启动子PglaAR表达载体的构建 | 第80-83页 |
| 3.4.2 重复兼去阻遏型启动子PglaARD表达载体的构建 | 第83-88页 |
| 3.4.3 启动子重组菌株的筛选和鉴定 | 第88-90页 |
| 3.4.4 启动子重组菌株的检测 | 第90-91页 |
| 3.4.5 发酵培养基中碳源对启动子重组菌株产酶的影响 | 第91-94页 |
| 4 讨论 | 第94-98页 |
| 4.1 黑曲霉菌株CICC2462淀粉水解酶系基因表达调控的特点 | 第94-95页 |
| 4.2 发酵培养基中氮源对amyR缺失菌株的影响 | 第95-96页 |
| 4.3 amyR缺失菌株中强启动子的预测 | 第96-98页 |
| 5 结论 | 第98-100页 |
| 5.1 A.niger CICC2462的分泌蛋白质组分析 | 第98页 |
| 5.2 敲除淀粉水解酶系正调控因子AmyR的研究 | 第98页 |
| 5.3 碳代谢抑制因子CreA的调控研究 | 第98-99页 |
| 5.4 提高糖化酶基因glaA启动子转录效率的研究 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-109页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第109页 |
