| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 酿酒酵母Mek1与Hop1相互作用的结构与功能研究 | 第12-72页 |
| 1.1 背景介绍 | 第12-32页 |
| 1.1.1 引言 | 第12页 |
| 1.1.2 减数分裂前期Ⅰ的染色体行为 | 第12-14页 |
| 1.1.3 同源染色体间的配对、联会和重组 | 第14-17页 |
| 1.1.4 联会复合体 | 第17-18页 |
| 1.1.5 线性元件 | 第18-20页 |
| 1.1.6 联会复合体侧向元件Hop1的组装与功能 | 第20-22页 |
| 1.1.7 减数分裂特异性激酶Mek1 | 第22-25页 |
| 1.1.8 FHA结构域的结构特点 | 第25-28页 |
| 1.1.9 FHA结构域的底物识别特点 | 第28-30页 |
| 1.1.10 FHA结构域介导的磷酸化非依赖性的相互作用 | 第30-31页 |
| 1.1.11 总结 | 第31-32页 |
| 1.2 实验材料与方法 | 第32-48页 |
| 1.2.1 酿酒酵母及裂殖酵母Mek1 FHA结构域的基因获取 | 第32页 |
| 1.2.2 目的基因片段回收 | 第32-33页 |
| 1.2.3 目的基因片段的双酶切实验 | 第33-34页 |
| 1.2.4 质粒的改造提取及线性化 | 第34-35页 |
| 1.2.5 重组质粒的构建 | 第35页 |
| 1.2.6 感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 1.2.7 连接产物转化至感受态细胞 | 第35-36页 |
| 1.2.8 单克隆的鉴定与测序 | 第36页 |
| 1.2.9 突变体的构建 | 第36-37页 |
| 1.2.10 Mek1 FHA结构域的表达 | 第37页 |
| 1.2.11 6×His标签融合蛋白质的纯化 | 第37-39页 |
| 1.2.12 GST标签蛋白质的亲和纯化 | 第39页 |
| 1.2.13 重组蛋白质的TEV酶切 | 第39-40页 |
| 1.2.14 蛋白质的精细纯化-AKTA系统分子筛 | 第40-41页 |
| 1.2.15 蛋白质的精细纯化-AKTA系统离子交换 | 第41-42页 |
| 1.2.16 SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第42-43页 |
| 1.2.17 等温滴定量热实验 | 第43-45页 |
| 1.2.18 蛋白质晶体的生长、数据收集及结构解析 | 第45页 |
| 1.2.19 蛋白质的圆二色光谱 | 第45-48页 |
| 1.3 实验结果 | 第48-64页 |
| 1.3.1 酿酒酵母和裂殖酵母Mek1 FHA结构域的重组表达 | 第48-50页 |
| 1.3.2 体外鉴定酿酒酵母Mek1-FHA对Hop1 pThr318的优先选择性 | 第50-51页 |
| 1.3.3 酿酒酵母Mek1-FHA单体及与Hop1 pThr318复合物晶体结构 | 第51-54页 |
| 1.3.4 酿酒酵母Mek1-FHA与Hop1 pThr318的相互作用细节 | 第54-56页 |
| 1.3.5 Mek1-FHA对Hop1 pThr318的pT+2和pT+3的特异性相互作用 | 第56-57页 |
| 1.3.6 Mek1-FHA的结构特点及其PSXS Motif | 第57-60页 |
| 1.3.7 酿酒酵母Mek1-FHA结合底物的鉴定 | 第60-61页 |
| 1.3.8 裂殖酵母Mek1-FHA结合底物的鉴定 | 第61-64页 |
| 1.4 讨论 | 第64-68页 |
| 1.4.1 酿酒酵母Mek1 FHA结构域结合底物的特异性 | 第64页 |
| 1.4.2 FHA结构域介导的非传统的相互作用 | 第64-65页 |
| 1.4.3 酿酒酵母和裂殖酵母Mek1激酶活性的调控机制 | 第65-68页 |
| 1.5 课题总结与展望 | 第68-72页 |
| 1.5.1 酿酒酵母Hop1 SCD上多磷酸化位点与Mek1-FHA的相互作用 | 第68-69页 |
| 1.5.2 酿酒酵母Mek1激酶激活机制的研究 | 第69-70页 |
| 1.5.3 裂殖酵母Mek1 pThr15和Hop1 pThr270功能探索 | 第70-72页 |
| 第2章 海环杆菌去乙酰化酶CmCBDA结构与功能的研究 | 第72-96页 |
| 2.1 背景介绍 | 第72-84页 |
| 2.1.1 骨关节炎的特点及其预防与治疗 | 第72-73页 |
| 2.1.2 葡萄糖胺在骨关节炎预防与治疗中的作用 | 第73-75页 |
| 2.1.3 葡萄糖胺的需求与生产工艺探索 | 第75-77页 |
| 2.1.4 葡萄糖胺的工业化生产流程 | 第77-78页 |
| 2.1.5 CmCBDA的鉴定和酶活特点 | 第78-80页 |
| 2.1.6 Ydjc家族的研究进展 | 第80-82页 |
| 2.1.7 总结 | 第82-84页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第84-86页 |
| 2.2.1 目的基因的合成与优化 | 第84页 |
| 2.2.2 CmCBDA的克隆表达与纯化 | 第84页 |
| 2.2.3 晶体的初步筛选 | 第84-85页 |
| 2.2.4 衍射数据的收集和处理 | 第85-86页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第86-95页 |
| 2.3.1 CmCBDA的全长表达 | 第86-87页 |
| 2.3.2 CmCBDA的晶体结构描述 | 第87-91页 |
| 2.3.3 酶活口袋的细节描述 | 第91页 |
| 2.3.4 Ydjc家族成员的序列比对结果 | 第91-92页 |
| 2.3.5 CmCBDA的同源性搜索 | 第92-93页 |
| 2.3.6 CmCBDA对乙酰葡萄糖胺选择性识别的初步阐述 | 第93-95页 |
| 2.4 总结与展望 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 附录1 | 第104-108页 |
| 附录2 | 第108-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 在读期间发表的学术论文与参加的学术会议 | 第114页 |
