| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| 1 植物雄性不育 | 第15-16页 |
| ·植物雄性不育类型 | 第15-16页 |
| 2 油菜雄性不育研究进展 | 第16-20页 |
| ·油菜细胞质雄性不育机理 | 第16-18页 |
| ·线粒体与细胞质雄性不育 | 第16-17页 |
| ·基因表达调控、蛋白质、酶与细胞质雄性不育 | 第17页 |
| ·核基因与细胞质雄性不育 | 第17-18页 |
| ·油菜细胞质雄性不育基因的克隆 | 第18页 |
| ·油菜细胞核雄性不育研究进展 | 第18-20页 |
| ·油菜细胞核雄性不育细胞生物学特征 | 第18-19页 |
| ·油菜细胞核雄性不育基因的克隆 | 第19-20页 |
| 3 植物绒毡层研究进展 | 第20-21页 |
| ·绒毡层的形成及特点 | 第20页 |
| ·绒毡层功能 | 第20-21页 |
| ·提供营养 | 第20-21页 |
| ·分泌胼胝质酶 | 第21页 |
| ·参与花粉外壁和花粉包被的合成 | 第21页 |
| 4 分离克隆植物育性基因的方法 | 第21-24页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第21-22页 |
| ·图位克隆 | 第22页 |
| ·T-DNA标签 | 第22页 |
| ·转座子 | 第22-23页 |
| ·同源序列法 | 第23-24页 |
| 第二章 同源序列法克隆甘蓝型油菜雄性不育基因BnMS1及其同源性比对 | 第24-37页 |
| 1 材料与方法 | 第24-29页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·实验试剂 | 第25页 |
| ·油菜总DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·CaCl_2法制备DH5α热击感受态细胞 | 第26页 |
| ·热击法转化大肠杆菌操作步骤 | 第26页 |
| ·琼脂糖胶回收DNA | 第26-27页 |
| ·甘蓝型油菜核雄性不育基因BnMS1的克隆 | 第27-28页 |
| ·PCR Walking技术操作步骤 | 第28-29页 |
| ·酶切-连接文库的准备 | 第28页 |
| ·初级PCR | 第28-29页 |
| ·次级PCR Walking | 第29页 |
| ·BnMS1基因与拟南芥MS1基因的同源性比对 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-30页 |
| ·甘蓝型油菜雄性不育基因BnMS1的克隆 | 第29页 |
| ·BnMS1基因与拟南芥MS1基因的同源性比对 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-37页 |
| ·油菜育性相关基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·甘蓝型油菜核雄性不育基因BnMS1的后续研究 | 第31页 |
| ·BnMS1基因精细定位和克隆研究的最新进展 | 第31-37页 |
| 第三章 BnMS1反义载体及MS1基因amiRNA载体的构建及转化拟南芥 | 第37-52页 |
| 1 材料和方法 | 第38-47页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·工具酶和试剂 | 第38页 |
| ·拟南芥培养 | 第38-39页 |
| ·拟南芥总RNA的提取 | 第39页 |
| ·拟南芥总RNA的RT-PCR | 第39-40页 |
| ·质粒的提取 | 第40页 |
| ·农杆菌热击感受态EHA105的制备 | 第40-41页 |
| ·BnMS1基因反义载体的构建及转化拟南芥 | 第41-44页 |
| ·BnMS1基因片段的克隆测序 | 第41-42页 |
| ·pMD-antiMS质粒的提取 | 第42页 |
| ·antiMS反义表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·重组农杆菌转化拟南芥 | 第43页 |
| ·转anti-MS反义载体拟南芥的筛选及鉴定 | 第43-44页 |
| ·拟南芥MS1基因amiRNA植物表达载体的构建及转化拟南芥 | 第44-47页 |
| ·amiRNA的克隆策略 | 第44-45页 |
| ·amiRNA植物表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·重组农杆菌转化拟南芥及转基因拟南芥的筛选及鉴定 | 第46页 |
| ·转amiRNA载体拟南芥花粉活性检测 | 第46-47页 |
| 2 结果分析 | 第47页 |
| ·BnMS1基因反义载体的构建及转化拟南芥 | 第47页 |
| ·amiRNA载体的构建及转化拟南芥 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-52页 |
| ·转反义载体及人工小RNA载体转化拟南芥结果分析 | 第47-48页 |
| ·反义RNA技术在雄性不育上的应用 | 第48-52页 |
| 第四章 BnMS1启动子序列的克隆及载体的构建 | 第52-57页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·实验试剂 | 第52-53页 |
| ·BnMS1启动子序列的克隆测序 | 第53页 |
| ·BnMS1启动子与pGUS-eGFP双表达载体酶切连接 | 第53-54页 |
| ·BnMS1启动子与双表达载体酶切 | 第53-54页 |
| ·BnMS1启动子与pGUS-eGFP双表达载体连接 | 第54页 |
| ·重组pGUS-eGFP载体转化入大肠杆菌中 | 第54页 |
| ·重组pGUS-eGFP载体质粒的提取 | 第54页 |
| ·重组pGUS-eGFP载体质粒转化入农杆菌中 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-55页 |
| ·BnMS1启动子序列的克隆测序 | 第54页 |
| ·重组pGUS-eGFP大肠杆菌的PCR结果 | 第54-55页 |
| ·重组pGUS-eGFP载体质粒转化入农杆菌中的PCR结果 | 第55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| ·利用绒毡层发育相关基因创造雄性不育 | 第55-56页 |
| ·BnMS1启动子的后续研究 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第67-68页 |
